Compteur de cellules

Au compteur de cellules : Cellules A431

La lignée cellulaire A431 du carcinome épidermoïde exprime des taux anormalement élevés de récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) et constitue un modèle utile pour étudier la signalisation à médiation par l’EGFR, qui régule la croissance, la survie, la prolifération et la différenciation des cellules de mammifère. Provenant de l’épiderme d’une patiente âgée de 85 ans et créées par D. J. Giard et al., les cellules A431 se sont révélées être un système de modèle utile pour étudier le cycle cellulaire, l’apoptose et le cancer.

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Figure 1 : Images obtenues avec le cytomètre SpectraMax MiniMax

Les cellules A431 ont été colorées avec le colorant rouge EarlyTox™ Live, puis imagées en utilisant le cytomètre SpectraMax MiniMax. Les cellules ont été identifiées avec un paramètre personnalisé défini par l’utilisateur. En haut : Images superposées par lumière transmise et par fluorescence rouge ; En bas : cellules identifiées par analyse StainFree (les masques violets montrent les cellules identifiées par le logiciel).

Figure 2 : Numérations cellulaires StainFree vs. numérations cellulaires par fluorescence

Les cellules A431 ont été ensemencées à des densités comprises entre 156 et 20 000 cellules par puits, et les noyaux ont été colorés avec du colorant rouge EarlyTox Live. Les images ont été acquises à partir de 4 sites par puits, et une région d’intérêt au centre des puits a été sélectionnée pour analyse. Les cellules ont ensuite été comptées par la méthode StainFree (tracé bleu) ou en comptant les noyaux fluorescents rouges (tracé rouge).

Figure 3 : Essai EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488

Les cellules A431 ont été traitées avec des dilutions en série de staurosporine (tracé rouge), de camptothécine (tracé vert) et d’étoposide (tracé bleu) durant 24 heures, puis testées concernant l’apoptose avec le kit d'essai EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488. Les cellules exprimant la caspase-3/7 ont été colorées en vert fluorescent et ont été imagées et comptées avec le cytomètre SpectraMax MiniMax. Les résultats ont été tracés sous forme de nombre de cellules apoptotiques vs. concentration en composé grâce au logiciel SoftMax Pro.

Astuce :

Les cellules A431 ont une morphologie épithéliale et tendent à se développer en amas, ce qui les rend plutôt difficiles à compter. Pour la numération StainFree, utiliser « Créer un nouveau paramètre », puis utiliser l’outil de dessin jaune pour dessiner le pourtour exact des cellules. Utilisez l’outil de dessin bleu pour indiquer les zones sans cellule et les artefacts.

Kit d’outils d’analyse des cellules A431

Paramètre
Paramétrage pour les numérations cellulaires
Configuration optique
Cytomètre d'imagerie SpectraMax MiniMax 300
Mode lecture
Imagerie
Type de lecture
Point final
Paramétrages de longueur d’onde

Lumière transmise (TL)

713 nm (fluorescence rouge)

Paramétrages d’acquisition d'image

Exposition à la TL : 7 ms

Réglage de la mise au point de la TL : 0 µm

Exposition 713 : 12 ms

Réglage de la mise au point de la 713 : 20 µm

Paramétrages d’analyse d'image

Type d’analyse : Analyse d'objets discrets

Longueur d’onde pour trouver des objets : TL (StainFree) ou 713 (noyaux rouges)

Trouver des objets

TL : Créer un nouveau paramètre (personnalisé)

713 : Définir la taille et l’intensité : Taille = 10-30 µm, Intensité au-dessus du bruit de fond = 70

À propos de la technologie StainFree Cell Detection

Les essais d’imagerie cellulaires nécessitent généralement l'utilisation de sondes fluorescentes pouvant se révéler toxiques pour les cellules vivantes ou ne peuvent être utilisées que dans des cellules fixées. Une méthode sans marquage pour analyser les numérations cellulaires et la confluence des cellules vous permet de surveiller quantitativement la prolifération et la santé des cellules sans flux de travail fastidieux pouvant perturber la viabilité cellulaire.

La plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3/i3x avec le cytomètre d’imagerie MiniMax 300 utilise la technologie unique StainFree Cell Detection en attente de brevet, qui vous permet de réaliser des essais de prolifération cellulaire, de cytotoxicité et d’autres essais sans colorations nucléaires tels que DAPI, qui s’intercale à l’ADN, ni colorants de cellules vivantes qui sont toxiques à long terme pour les cellules.