Compteur de cellules
Au compteur de cellules : Cellules NIH3T3
Établie en 1963 par les chercheurs George Todardo et Howard Green, la lignée cellulaire NIH3T3 a été dérivée de fibroblastes embryonnaires de souris. Les cellules se sont spontanément immortalisées et ont été nommées d’après leur protocole de mise en culture « 3-day transfer, inoculum 3x105 cells » (Transfert 3 jours, inoculum 3x105 cellules). Correspondant maintenant à la lignée cellulaire standard de fibroblastes, elles sont connues pour être d’excellentes hôtes de transfection et des modèles pour les expériences de pluripotence des cellules souches induite. Elles sont également utiles comme cellules nourricières dans la recherche sur les cellules souches embryonnaires humaines et sont souvent utilisées pour mettre en culture les kératinocytes, car les facteurs de croissance issus de NIH3T3 sont favorables au développement des kératinocytes.
La structure allongée et la taille variable des cellules NIH3T3 peuvent poser des difficultés pour l’analyse des images. Toutefois, en utilisant la technologie StainFree, nous pouvons compter ces cellules à la forme irrégulière avec une grande précision.
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Figure 1 - Analyse StainFree des cellules NIH3T3
Des cellules NIH3T3 ont été évaluées par imagerie avec le cytomètre d’imagerie SpectraMax MiniMax 300, et les cellules ont été identifiées à l’aide du paramètre d’analyse prédéfini « CellsB ». À gauche se trouve l’image d'origine par lumière transmise, et à droite se trouve la même image avec des masques violets indiquant les cellules identifiées par le logiciel.
Figure 2 : Numérations des cellules NIH3T3
Des cellules NIH3T3 ont été ensemencées au cours d’une série de dilution au 1:2 dans une plaque à 96 puits. Les cellules ont été fixées et marquées avec un colorant nucléaire. Après marquage, le cytomètre d'imagerie SpectraMax MiniMax 300 a été utilisé pour compter les cellules en utilisant le colorant rouge nucléaire (courbe rouge) ou la technologie StainFree™ Cell Detection (courbe bleue) comme base de l’identification des cellules. Les deux méthodes de comptage donnent des résultats pratiquement identiques, et les deux courbes ont r2 > 0,99.
Figure 3 - Cellules NIH3T3 colorées
Cellules NIH3T3 marquées avec la phalloïdine AlexaFluor 488 et un colorant nucléaire rouge. Les cellules ont été évaluées par imagerie sur le cytomètre d’imagerie SpectraMax MiniMax 300.
Astuce :
Pour de nombreuses cultures de NIH3T3, vous pouvez facilement compter les cellules en utilisant l’un des paramètres prédéfinis du logiciel SoftMax Pro Software. Vous pouvez utiliser le paramètre « CellsB » ou « CellsD ». Sinon, vous pouvez utiliser les outils de dessin pour créer un nouveau paramètre personnalisé adapté à vos cellules particulières. Afin d’éviter les problèmes inhérents à la forme irrégulière et à la tendance à s’amasser des cellules, vous pouvez dessiner légèrement dans les limites d’une cellule d’intérêt. Pour éviter tout surcomptage provoqué par les longs processus sur ces cellules, dessinez simplement sur les processus avec l’outil de fond pour ne pas les compter comme cellules distinctes.
Kit d’outils d’analyse des cellules NIH3T3
- Plateforme de détection de microplaques multimode SpectraMax® i3
- Cytomètre d'imagerie SpectraMax® MiniMax™ 300
- Logiciel SoftMax® Pro
Paramétrages de l’instrument
À propos de la technologie StainFree Cell Detection
Les essais d’imagerie cellulaires nécessitent généralement l'utilisation de sondes fluorescentes pouvant se révéler toxiques pour les cellules vivantes ou ne peuvent être utilisées que dans des cellules fixées. Une méthode sans marquage pour analyser les numérations cellulaires et la confluence des cellules vous permet de surveiller quantitativement la prolifération et la santé des cellules sans flux de travail fastidieux pouvant perturber la viabilité cellulaire.
La plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3 avec le cytomètre d’imagerie MiniMax 300 utilise la technologie unique StainFree Cell Detection en attente de brevet, qui vous permet de réaliser des essais de prolifération cellulaire, de cytotoxicité et d’autres essais sans colorations nucléaires tels que DAPI, qui s’intercale avec l’ADN, et sans colorants de cellules vivantes qui sont toxiques à long terme pour les cellules.