Compteur de cellules
Au compteur de cellules : Cellules endothéliales aortiques de rat
Les cellules endothéliales aortiques de rat ont été utilisées dans un grand nombre d’études scientifiques, notamment d’adhérence cellule/cellule, de migration, d’angiogenèse, et l’étude des voies de signalisation cellulaire impliquées dans la fonction endothéliale dans des conditions normales et pathologiques. Comme il s’agit de cellules primaires, leur utilisation dans le criblage de médicaments peut être délicate. L’imagerie de cellules vivantes et la mesure de la confluence des cellules avant l’exécution d’un test peuvent être essentielles à la réussite.
Visionner le webinaire StainFree Cell Detection
Télécharger la note d’application StainFree Cell Detection
Télécharger le livre électronique : comptez les cellules comme un-e pro
Figure 1 - Image par lumière transmise de cellules endothéliales aortiques de rat
L’image montre les diverses morphologies et processus cellulaires dans une seule culture primaire.
Figure 2 - Comptage StainFree des cellules endothéliales aortiques de rat
Des cellules endothéliales aortiques de rat ont été évaluées par imagerie avec le cytomètre d’imagerie SpectraMax i3 MiniMax 300, et les cellules ont été identifiées à l’aide d’un paramètre d’analyse de terrain personnalisé. À gauche se trouvent les images par lumière transmise originales (en haut, culture avec densité supérieure ; en bas, culture avec densité inférieure), et à droite se trouvent les mêmes images avec des masques violets indiquant les cellules identifiées par le logiciel.
Les images ont été gracieusement fournies par le Dr Virginia Huxley de l’Université du Missouri, Columbia, MO (États-Unis), avec l’aide de notre chercheur d’application sur le terrain, Randy Milano.
Astuce :
La cytométrie par imagerie des cellules endothéliales aortiques de rat peut poser des problèmes car elles sont assez plates, peuvent avoir diverses morphologies, et ont même parfois de longs processus rappelant des excroissances neuronales comme illustré à la Figure 1. C’est là que l’algorithme d’apprentissage automatique supervisé utilisé dans la technologie StainFree devient réellement pratique. Dans les paramètres d’analyse d’images, choisissez l’option « Créer un nouveau paramètre » et focalisez votre dessin au centre des cellules, en ignorant les processus cellulaires (excroissances). N’oubliez pas d’inclure quelques cellules représentatives des différentes morphologies, et vous obtiendrez des résultats comme ceux illustrés à la Figure 2.
Conseil utile : le paramétrage du réglage de la mise au point sur une valeur plus négative peut donner des images plus distinctes de ces cellules qui sont plus faciles à compter par le logiciel.
Kit d’outils d’analyse des cellules endothéliales aortiques de rat
- Plateforme de détection de microplaques multimode SpectraMax® i3
- Cytomètre d’imagerie SpectraMax®MiniMax™ 300
- Logiciel SoftMax ® Pro Software
Paramétrages de l’instrument
Exposition : 7 ms
Réglage de la mise au point : -455 µm (peut être optimisé selon les caractéristiques des cellules utilisées)
Type d’analyse : Analyse d'objets discrets
Longueur d’onde pour trouver des objets : TL
À propos de la technologie StainFree Cell Detection
Les essais d’imagerie cellulaires nécessitent généralement l'utilisation de sondes fluorescentes pouvant se révéler toxiques pour les cellules vivantes ou ne peuvent être utilisées que dans des cellules fixées. Une méthode sans marquage pour analyser les numérations cellulaires et la confluence des cellules vous permet de surveiller quantitativement la prolifération et la santé des cellules sans flux de travail fastidieux pouvant perturber la viabilité cellulaire.
La plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3 avec le cytomètre d’imagerie MiniMax 300 utilise la technologie unique StainFree Cell Detection en attente de brevet, qui vous permet de réaliser des essais de prolifération cellulaire, de cytotoxicité et d’autres essais sans colorations nucléaires tels que DAPI, qui s’intercale avec l’ADN, et sans colorants de cellules vivantes qui sont toxiques à long terme pour les cellules.