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Compteur de cellules

Au compteur de cellules : Cellules THP-1

Provenant du sang d’un patient atteint d’une leucémie monocytaire aiguë il y a plus de 40 ans, la lignée monocytaire humaine THP-1 est largement utilisée pour l’étude de la fonction des monocytes et des macrophages, ainsi que dans la recherche sur la leucémie. Normalement, les cellules THP-1 se développent en suspension, mais il est possible d'induire leur différenciation en cellules adhérentes ressemblant à des macrophages, qui expriment l’IL-8 et d’autres marqueurs, et peuvent donc servir de système modèle pour la différenciation.

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Figure 1 : Numérations nucléaires StainFree et fluorescentes de cellules THP-1 non différenciées

Numérations nucléaires StainFree et fluorescentes de cellules THP-1 non différenciées

Des cellules THP-1 ensemencées à des densités comprises entre 156 et 20 000 cellules par puits ont été comptées par la technologie StainFree (cercles bleus), ou leurs noyaux ont été comptés après coloration avec le colorant rouge EarlyTox Live (cercles rouges). Les numérations cellulaires obtenues avec les deux méthodes présentaient une différence de 5 % ou moins à toutes les densités cellulaires.

Figure 2 : Cellules THP-1 non différenciées imagées sur le cytomètre MiniMax

Cellules THP-1 non différenciées imagées sur le cytomètre MiniMax

A, cellules THP-1 colorées avec le colorant rouge EarlyTox Live. B, masques d’objet violets montrant les cellules identifiées par le logiciel SoftMax Pro dans le canal d’imagerie par fluorescence rouge. C, cellules imagées dans le canal TL. D, cellules identifiées par analyse StainFree dans le canal TL.

Figure 3 : Temps de différenciation des THP-1

Temps de différenciation des THP-1

Des cellules THP-1 ont été ensemencées à raison de 20 000 cellules par puits dans une plaque à 96 puits à fond transparent et paroi noire. Elles ont été traitées avec 25 ng/µl de PMA ou avec du témoin DMSO. Les cellules ont été imagées au jour 0, au jour 1 après l’ajout et au jour 2 après l’ajout. La flèche jaune indique une cellule différenciée avec une morphologie aplatie adhérente.

Figure 4 : Prolifération des cellules THP-1

Prolifération des cellules THP-1

On a mesuré la prolifération cellulaire dans des cellules témoins traitées avec du PMA ou du DMSO par la technologie StainFree. Le traitement au PMA interrompt la prolifération cellulaire, mais les cellules témoins continuent de se diviser.

Figure 5 : ELISA de l’IL-8

ELISA de l’IL-8

La concentration en IL-8 a été mesurée par ELISA dans des cellules THP-1 traitées avec du PMA et du DMSO. Les cellules ont été ensemencées à raison de 24 000 cellules par puits, et les surnageants ont été recueillis pour essai 48 heures après le début du traitement. L'essai ELISA de l’IL-8 basé sur l’absorbance a été détecté avec un lecteur de microplaques SpectraMax i3.

Astuce :

Pour les cellules en suspension, telles que les cellules THP-1 non différenciées, vous pouvez utiliser un temps d’exposition plus court afin de réduire le flou provoqué par le mouvement de flottement des cellules. Le cytomètre d'imagerie SpectraMax MiniMax 300 peut changer de longueur d'onde très rapidement, réduisant ainsi la quantité de mouvements des cellules pouvant survenir entre les images, ce qui conduit une meilleure superposition des images prises dans différents canaux. Le paramétrage d’analyse d’images TL prédéfini «CellsC» fonctionne bien pour les cellules en suspension ayant une morphologie arrondie, tandis que «CellsA» identifie de façon plus précise les cellules différenciées plus aplaties.

Kit d’outils d’analyse des cellules THP-1

Paramétrages de l’instrument pour l’imagerie et la numération cellulaire

Paramètre
THP-1 non différenciée
THP-1 différenciée
Configuration optique
Cytomètre d'imagerie SpectraMax MiniMax 300
Mode lecture
Imagerie
Type de lecture
Point final
Paramétrages de longueur d’onde
Lumière transmise, 713
Paramétrages d’acquisition d'image
Exposition : 2 ms (TL), 17 ms (713)
Exposition : 6 ms (TL)
Paramétrages d’analyse d'image

Type d’analyse : Analyse d'objets discrets

Longueur d’onde pour la recherche d’objets : TL ou 713

Trouver des objets
Paramétrage prédéfini : CellsC
Paramétrage prédéfini : CellsA

À propos de la technologie StainFree Cell Detection

Les essais d’imagerie cellulaires nécessitent généralement l'utilisation de sondes fluorescentes pouvant se révéler toxiques pour les cellules vivantes ou ne peuvent être utilisées que dans des cellules fixées. Une méthode sans marquage pour analyser les numérations cellulaires et la confluence des cellules vous permet de surveiller quantitativement la prolifération et la santé des cellules sans flux de travail fastidieux pouvant perturber la viabilité cellulaire.

La plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3 avec le cytomètre d’imagerie MiniMax 300 utilise la technologie unique StainFree Cell Detection en attente de brevet, qui vous permet de réaliser des essais de prolifération cellulaire, de cytotoxicité et d’autres essais sans colorations nucléaires tels que DAPI, qui s’intercale avec l’ADN, et sans colorants de cellules vivantes qui sont toxiques à long terme pour les cellules.