Signalisation cellulaire
La signalisation cellulaire permet aux cellules de réagir à leur environnement comme de communiquer avec d’autres cellules. Les protéines situées à la surface des cellules peuvent recevoir des signaux de l’environnement et transmettre des informations dans la cellule via une série d’interactions protéiques et de réactions biochimiques qui constituent une voie de signalisation. Les organismes multicellulaires dépendent d’un grand nombre de voies de signalisation pour coordonner la croissance, la régulation et le fonctionnement des cellules et des tissus. Si la signalisation entre les cellules ou à l’intérieur des cellules est déréglée, des réponses cellulaires inappropriées peuvent conduire à un cancer ou à d’autres maladies.
La signalisation cellulaire est le nom collectif donné aux processus par lesquels les cellules reçoivent des signaux, les interprètent et y répondent. Ces signaux vont des signaux physiques, comme la température, la lumière ou l’électricité, aux signaux chimiques, comme les petites molécules qui se fixent à la surface des cellules. Grâce à leur capacité à traiter ces signaux, les cellules peuvent interagir entre elles et avec l’environnement. En outre, la signalisation cellulaire constitue la base du développement, de la réponse immunitaire et de l’homéostasie dans tous les organismes. C’est de cette façon que nos cellules nerveuses communiquent avec nos muscles pour faciliter le mouvement ou que le corps déclenche une réponse immunitaire lorsqu’il reconnaît des agents pathogènes.
Réponses cellulaires
De nombreux outils ont été mis au point pour mesurer les réponses cellulaires se produisant dans un grand nombre de voies de signalisation. La signalisation des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) peut être étudiée à l’aide de tests allant du flux de calcium, qui peut être surveillé à l’aide de colorants fluorescents, aux variations des molécules effectrices en aval évaluées par TR-FRET. Les molécules fluorescentes ont été exploitées pour révéler les changements d’activité des kinases qui jouent un rôle clé dans les voies de signalisation. Les tests de gènes rapporteurs de type luciférase utilisant des réactions luminescentes sont devenus un outil polyvalent d'étude de la régulation des gènes et de la signalisation cellulaire, tant dans la recherche fondamentale que dans la découverte de médicaments.
La détection des signaux et des réponses cellulaires peut nous aider à clarifier le rôle des interactions entre les cellules dans les maladies. La découverte de médicaments peut également bénéficier grandement des tests de signalisation cellulaire, car de nombreux médicaments inhibent les interactions ligand-protéine aberrantes pendant la transduction du signal.
Applications et tests de signalisation cellulaire
Nous présentons ci-dessous diverses applications de signalisation cellulaire qui peuvent être exécutées à l’aide de lecteurs de microplaques dotés de modes de détection par fluorescence, TR-FRET, polarisation de fluorescence et luminescence.
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Dosages du calcium et IP-One (GPCR, couplage Gq)
La signalisation cellulaire grâce aux récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) peut être évaluée en surveillant les effecteurs en aval comme l'AMP cyclique (AMPc) ou le calcium. Le flux de calcium en réponse à l’activation des récepteurs couplés aux protéines Gq est couramment surveillé en temps réel dans les cellules vivantes en utilisant des colorants sensibles au calcium sur un lecteur de microplaques en fluorescence. Une autre branche de cette voie est surveillée à l’aide d’un test TR-FRET pour IP1.
Voici quelques notes d’application qui peuvent se révéler intéressantes :
- Étude de l’activation du récepteur couplé aux protéines Gq sur le lecteur SpectraMax i3x avec un module d’injecteur*
- Optimisation d'un test sur le récepteur muscarinique M3 en utilisant des cellules CHO congelées sur le lecteur FlexStation 3
- Signalisation calcique avec les kits de test FLIPR Calcium 6 et 6-QF sur le lecteur FlexStation 3
- Test HTRF IP-One Gq sur lecteurs SpectraMax
Tests cAMP (GPCR, couplage Gi/Gs)
La surveillance des taux de cAMP, un second messager produit en réponse à l’activation de l’adénylate cyclase, est l’une des façons les plus courantes de cribler les agonistes et antagonistes des récepteurs couplés aux protéines Gi/Gs. Les taux de cAMP peuvent être surveillés en utilisant des molécules fluorescentes qui se fixent au cAMP et sont détectées par un lecteur de microplaques en fluorescence. Certains tests cAMP nécessitent d’autres modes de détection, comme la fluorescence en temps résolu.
Voici quelques notes d’application qui peuvent se révéler intéressantes :
- Réaliser une solution de flux de travail cAMP en utilisant le Kit de test fluorescent CatchPoint cAMP
- Détectez l’activité des GPCR grâce au test HTRF cAMP-Gs HiRange
- Test HTRF cAMP HiRange sur les lecteurs de microplaques multimode SpectraMax
- Tests dymaniques HTRF cAMP 2 et IP-One sur le lecteur SpectraMax M5e
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Kinases, phosphatases et phosphodiestérases
Depuis de nombreuses années, les tests d’activité kinase étaient réalisés en utilisant des isotopes radioactifs ou des anticorps hautement spécifiques. La technologie IMAP® exclusive de Molecular Devices offre un test homogène non radioactif adapté au criblage haut débit et applicable à un grand nombre de kinases, de phosphatases et de phosphodiestérases, indépendamment de la séquence peptidique du substrat.
Voici quelques notes d’application qui peuvent se révéler intéressantes :
Flux de calcium neuronal
Le suivi des variations du taux de calcium intracellulaire est une technique extrêmement utile pour étudier les divers rôles joués par les ions calcium dans les neurones en fonctionnement. Une mesure directe du flux de calcium dynamique dans les réseaux neuronaux révèle la façon dont les neurones traitent les signaux depuis l’espace extracellulaire.
Cette note d'application démontre la faisabilité de la mesure du flux de calcium intracellulaire dans des neurones corticaux primaires de rat dans une microplaque fluorescente :
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Tests gène rapporteur simple/double luciférase
Les dosages par gène rapporteur sont des outils importants pour étudier l’expression des gènes associée à l’activation des voies de signalisation cellulaire. Les cellules sont transfectées avec un plasmide contenant le gène rapporteur et une séquence d’intérêt, généralement un promoteur ou un autre élément de contrôle transcriptionnel. Lorsque le promoteur est activé, le gène rapporteur est exprimé et son taux peut être mesuré.
En savoir plus sur les tests de gènes rapporteurs de type luciférase grâce à ces notes d’application :
- Surveillez l’activation de NF-kB à l'aide d'un dosage sensible à double rapporteur sur le lecteur de microplaques SpectraMax iD5
- Détectez l'expression de la dual luciférase sur le lecteur de microplaques FlexStation 3
- Tests dual Luciférase en formats 96 et 384 puits sur le SpectraMax L
- Mesure de l’expression de la luciférase à l’aide du kit de test gène rapporteur SpectraMax Glo Steady-Luc.
Dernières ressources
Ressources sur la signalisation cellulaire
Livre électronique
Le guide ultime des solutions de lecteur de microplaques
The Ultimate Guide to Microplate Reader Solutions
L’évaluation des lecteurs de microplaques ne doit pas être fastidieuse. Tout d’abord, déterminez vos besoins d’application. Si votre budget est limité, un lecteur à mode unique dédié à votre application principale peut…
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Plusieurs étapes à partir des stations de travail des lecteurs de microplaques
Multiple Steps from Microplate-Reader Workstations
Les chercheurs empruntent de nombreux chemins pour surmonter les difficultés des flux de travail. Par exemple, une station de travail comprenant un lecteur de microplaques peut prendre en charge plusieurs étapes, ce qui améliore l’efficacité et ajoute…
Note d'application
Test HTRF IP-One Gq sur le lecteur SpectraMax
HTRF IP-One Gq assay on SpectraMax Readers
La technologie HTRF® est une technologie polyvalente développée par Cisbio Bioassays pour détecter les interactions biomoléculaires.
Note d'application
Détectez l’activité des GPCR grâce au test HTRF cAMP-Gs HiRange
Detect GPCR activity with the cAMP-Gs HiRange HTRF assay
La technologie HTRF® est une technologie polyvalente développée par Cisbio pour détecter les interactions biomoléculaires.
Note d'application
Test de flux du calcium pour les études de neurotoxicité in vitro et le criblage de médicaments
Calcium flux assay for in vitro neurotoxicity studies and drug screening
L’imagerie du calcium, ou le suivi des variations du taux de calcium intracellulaire, est une technique extrêmement utile pour étudier les divers rôles joués par les ions calcium dans les neurones qui fonctionnent…
Note d'application
Surveillez l'activation NF-κB à l'aide d'un test du gène rapporteur dual luciferase sur le lecteur de microplaques SpectraMax iD5
Monitor NF-κB activation with a sensitive dual reporter assay on the SpectraMax iD5 microplate reader
Les gènes rapporteurs sont des outils très utiles pour étudier l'expression des gènes, servant de substituts aux gènes impliqués dans diverses voies de signalisation et pathologies. Les luciférases sont les plus…
Note d'application
Réaliser une solution de flux de travail cAMP en utilisant le Kit de test fluorescent CatchPoint cAMP
Complete cAMP workflow solution using the CatchPoint cAMP Fluorescent Assay Kit
Les GPCR, récepteurs couplés aux protéines G, sont des protéines transmembranaires importantes qui traduisent les signaux extracellulaires en réponses intracellulaires. Ces réponses intracellulaires se composent de…
Note d'application
Tests dymaniques HTRF cAMP 2 et IP-One sur le lecteur SpectraMax M5e
HTRF cAMP dynamic 2 and IP-One assays on the SpectraMax M5e reader
La HTRF est une technologie polyvalente développée par Cisbio pour la détection des interactions moléculaires entre les biomolécules.1 L’association des caractéristiques du transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET) et…
Note d'application
Détectez l'expression de la dual luciférase sur le lecteur de microplaques FlexStation 3
Detect dual luciferase expression on the FlexStation 3 microplate reader
Les dosages par gène rapporteur sont des outils importants pour étudier l’expression des gènes associée à l’activation des voies de signalisation cellulaire. Les cellules sont transfectées avec un plasmide contenant le gène rapporteur…
Note d'application
Tests de kinase IMAP FP sur le lecteur de microplaques multimode SpectraMax M5
IMAP FP kinase assays on the SpectraMax M5 Multi-Mode Microplate Reader
Les protéines kinases sont essentielles à la régulation de nombreux processus cellulaires. Depuis quelques années, elles forment l’une des principales classes de cellules effectrices pour le cancer et de nombreuses autres…
Note d'application
Tests dual Luciférase en formats 96 et 384 puits sur le nouveau SpectraMax L
Dual-Luciferase assays in 96- and 384-well formats on the new SpectraMax L
Les dosages par gène rapporteur sont utilisés pour étudier l’expression des gènes eucaryotiques. Dans les dosages avec deux gènes rapporteurs, les cellules sont transfectées avec deux vecteurs, le premier contenant un gène rapporteur expérimental...
Note d'application
Optimisation d'un test sur le récepteur muscarinique M3 en utilisant des cellules CHO congelées sur le lecteur FlexStation 3
Optimization of a muscarinic M3-receptor assay using frozen CHO cells on the FlexStation 3 reader
Les tests cellulaires peuvent souvent être difficiles et fastidieux à réaliser. Afin de faciliter et de simplifier ce processus complexe, des cellules congelées, qui peuvent être analysées sans mise en culture préalable, ont…
Note d'application
Signalisation calcique avec les kits de test FLIPR Calcium 6 et 6-QF sur le lecteur FlexStation 3
Calcium signaling with FLIPR Calcium 6 and 6-QF Assay Kits on the FlexStation 3 reader
Les kits de test FLIPR® Calcium de Molecular Devices utilisent des indicateurs sensibles au calcium et des colorants masquants exclusifs vous permettant de réaliser des criblages fluorescents très sensibles de…
Note d'application
Tests de phosphodiestérase IMAP sur les lecteurs de microplaques multimode SpectraMax
IMAP phosphodiesterase assays on SpectraMax Multi-Mode Microplate Readers
Les PDE, phosphodiestérases nucléotidiques cycliques, forment un groupe d’enzymes qui dégradent la liaison phosphodiester du cAMP et du cGMP, les messagers secondaires participant à une diversité de…
Note d'application
Test HTRF cAMP HiRange sur les lecteurs de microplaques multimode SpectraMax
HTRF cAMP HiRange Assay on SpectraMax Multi-Mode Microplate Readers
La technologie HTRF est une technologie polyvalente développée par Cisbio Bioassays pour détecter les interactions biomoléculaires1. Elle associe la technologie de transfert d'énergie par résonance de type Förster (FRET) à…
Note d'application
Etude de l'activation du récepteur couplé aux protéines Gq sur le lecteur SpectraMax i3x avec un module d'injecteur
Monitoring Gq protein-coupled receptor activation on the SpectraMax i3x reader with injector module
L’activation des récepteurs couplés aux protéines Gq est couramment surveillée en temps réel dans les cellules vivantes en utilisant des colorants sensibles au calcium sur un lecteur de microplaques à fluorescence. Manipulation automatisée des liquides dans…
Note d'application
Mesure de l’expression de la luciférase à l’aide du kit de test gène rapporteur SpectraMax Glo Steady-Luc.
Measuring luciferase expression using the SpectraMax Glo Steady-Luc Reporter Assay Kit
L’utilisation des gènes rapporteurs, tels que la luciférase, permet la surveillance non destructrice et hautement sensible de l’expression des gènes. La luciférase de luciole, une protéine monomère de 61 kD, est spécialement…