Assemblage

Le gène cible (gène d’intérêt) est ligaturé dans un vecteur aux caractéristiques souhaitables pour former un plasmide recombinant. Cette opération peut recourir à plusieurs techniques, notamment l’assemblage Gibson ou l’assemblage du Golden Gate.

01

Transformation

Les produits de la ligature sont introduits dans des cellules bactériennes compétentes, ce qui permet l’assimilation microbienne du plasmide modifié et la production de plusieurs copies de plasmide.

02

Ensemencement et criblage des colonies

Les cellules microbiennes sont étalées sur des boîtes d’agar solide où elles se développent en colonies individuelles qui sont ensuite criblées pour identifier celles disposant des caractéristiques souhaitées pour la sélection.

03

>Système de sélection de colonies microbiennes QPix

Appareil de repiquage de colonies microbiennes QPix

Sélection de colonies

Une fois les colonies souhaitées identifiées, elles peuvent être sélectionnées dans les boîtes d’agar solide et transférées dans un milieu liquide pour être mises en croissance et incubées pendant la nuit.

04

Incubation pendant la nuit

Les plaques de croissance contenant le milieu liquide sont scellées et transférées dans des incubateurs à agitation pour permettre aux microbes de se diviser et de produire davantage de copies du plasmide recombinant.

05

Mini-préparation

Les microbes sont lysés pour extraire les plasmides recombinants. Les plasmides sont ensuite purifiés à l’aide de méthodes à base de colonnes ou de billes pour obtenir de l’ADN très pur

06

Parler à un spécialiste

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flux de travail de plasmide