Tout d’abord, l’anticorps de capture se lie au fond du puits de la microplaque.
La plupart des tests ELISA sont exécutés dans des microplaques à 96 ou 384 puits, une microplaque à 96 puits étant la plus courante (parfois appelée microplaque ELISA). Le fond des puits de la microplaque sert de surface solide à laquelle les anticorps et d'autres réactifs se fixent. Des microplaques sont généralement incluses dans un kit ELISA.
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L’échantillon est ajouté au puits, et l’antigène présent dans l’échantillon se lie à l’anticorps de capture.
La substance non liée est éliminée par lavage, ne laissant que l’antigène d’intérêt et minimisant le risque de signal de bruit de fond élevé.
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L’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt, ce qui permet de détecter l’antigène.
Les anticorps non liés sont éliminés par lavage, ne laissant que les anticorps spécifiques de la cible d’intérêt et minimisant à nouveau le risque de signal de bruit de fond.
Laveur de microplaques AquaMax : L’aspiration et la distribution des 96 et 384 puits se font simultanément dans tous les puits, ce qui permet d’avoir des tests de grande précision et un traitement plus rapide des microplaques sans indexage mécanique des plaques ni traitement en quadrant.
Le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur, avec une intensité proportionnelle à la quantité d’antigène présente.
Selon l’enzyme et le substrat utilisés, la lecture peut également être fluorescente ou luminescente.
Le lecteur de microplaques détecte le produit réactionnel coloré et indique les valeurs de densité optique (D.O.) qui reflètent la quantité de lumière absorbée par les contenus de chaque puits.
Un lecteur de plaques ELISA, comme le lecteur de plaques ELISA en absorbance SpectraMax ABS Plus, détecte le changement de couleur produit lorsque l’antigène cible est présent. Cela est possible en mesurant la quantité de lumière ayant traversé les puits de la microplaque qui est absorbée par la matière se trouvant dans les puits. Plus la quantité d’antigène présente est importante, plus la valeur d’absorbance est élevée.
Un logiciel pour lecteurs de plaques ELISA, comme notre logiciel d’analyse de données SoftMax Pro, est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats à partir des valeurs d’absorbance fournies par le lecteur de microplaques.
Une courbe d’étalonnage est exécutée afin que la quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon puisse être calculée avec exactitude. Un protocole préconfiguré permet d’épargner du temps en calculant automatiquement les résultats.
La quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon est calculée, et différents échantillons (par exemple, les cellules soumises à différentes conditions de traitement) peuvent être comparés.
Nous proposons des cellules de travail évolutives prêtes à être automatisées, allant du niveau d’entrée de gamme au niveau avancé, qui peuvent être personnalisées pour répondre à vos besoins de recherche spécifiques
L’automatisation d’un flux de travail ELISA peut prendre les étapes fastidieuses de la préparation des échantillons, du pipetage des réactifs et du lavage des microplaques et peut améliorer la reproductibilité de vos résultats. Un flux de travail ELISA automatisé peut être associé à un logiciel de contrôle et à des composants, créant ainsi des cellules de travail haut débit évolutives.