Signalisation par second messager de GPCR couplés aux protéines Gi et Gs de cellules vivantes
La détection de l’activité des signaux des messagers secondaires GPCR couplés aux protéines Gi et Gs est traditionnellement réalisée en utilisant des tests par liaison radioactive ou les tests cAMP en point final qui requièrent une lyse cellulaire. Ces tests mesurent l’activité à un point de capture dans le temps unique dans la réponse cellulaire et ne fournissent pas d’informations sur la cinétique. Le couplage forcé des GPCR couplés aux protéines Gi et Gs à Gα16, suivi d’une détection de fluorescence du flux de calcium par rapport à l’activation des récepteurs agonistes est une autre option. De nouveau, ce test n’est pas optimal car il ne transmet pas le signal via la voie cAMP biologiquement pertinente.
Ici, nous démontrons l’activité endogène des récepteurs dans les lignées cellulaires CHO-K1 et HEK-293 exprimant de façon stable le plasmide GloSensor™ en utilisant le système FLIPR.
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