Kits de test de viabilité cellulaire EarlyTox

Kit de test EarlyTox™ vivantes/mortes

Ce kit qui mesure l'intégrité de la membrane cellulaire, permet de détecter à la fois les populations vivantes et mortes de cellules de mammifère à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence. La calcéine AM est un marqueur de viabilité cellulaire largement utilisé. La calcéine AM non fluorescente traverse la membrane cellulaire intacte puis est convertie en calcéine fluorescente par les estérases intracellulaires. Le nombre de cellules vivantes peut donc être déterminé à partir de l’intensité de la fluorescence verte dans le cytosol, avec une excitation à 495 nm et une émission à 530 nm. À l'inverse de la calcéine AM, l’EthD-III ne peut pas traverser la membrane plasmatique intacte et reste donc sous forme non fluorescente. En revanche, la perte d’intégrité de la membrane cellulaire associée à la mort cellulaire rend la membrane perméable à l’EthD-III. Dans ce cas, l'EthD-III pénètre dans les cellules et se fixe aux acides nucléiques, ce qui entraîne une fluorescence rouge intense des cellules mortes, avec une excitation à 530 nm et une émission à 645 nm.

Kit de test EarlyTox™ cellules vivantes

Ce kit qui mesure l'intégrité de la membrane cellulaire et l'activité des estérases intracellulaires, permet de détecter la population vivante de cellules de mammifère à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence. La calcéine AM est un marqueur de viabilité cellulaire largement utilisé. La calcéine AM non fluorescente traverse la membrane cellulaire intacte, puis est convertie en calcéine fluorescente par les estérases intracellulaires. Le nombre de cellules vivantes peut donc être déterminé à partir de l’intensité de la fluorescence verte dans le cytosol, avec une excitation à 495 nm et une émission à 530 nm. La calcéine AM est un colorant peu toxique pour la cellule, elle peut donc être utilisée pour le suivi de la viabilité à long terme ainsi que dans des tests de prolifération cellulaire.

Kit de test EarlyTox™ Caspase-3/7 R110

Ce kit permet d’analyser l’apoptose en mesurant l’activité des caspases 3 et 7 et leur séquence consensus cible : Asp-Glu-Val-Asp (DEVD). Les protéases caspase 3 et caspase 7 sont activées pendant la phase d’exécution de l’apoptose. Ce kit offre un test homogène en une seule étape, spécialement conçu pour les lecteurs de microplaques. Le substrat fluorogène (Ac-DEVD)2-R110 contient deux séquences DEVD consensus cibles et est entièrement hydrolysé dans le lysat cellulaire par ces enzymes. L’hydrolyse des deux peptides DEVD libère le colorant vert fluorescent R110, entraînant une augmentation significative de la fluorescence, avec une excitation à 490 nm et une émission à 520 nm. Le kit de test comprend l'inhibiteur compétitif des caspases 3 et 7, Ac-DEVD-CHO, à utiliser comme témoin négatif. Le kit inclut également du colorant R110 afin d'établir une courbe d'étalonnage permettant la quantification de l’activité caspase 3.

Kit de test EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 et kit de test EarlyTox™ Caspase-3/7-D NucView 488

Ce kit permet de détecter l’apoptose dans les populations de cellules intactes en se basant sur la mesure de l’activité des caspases 3 et 7 à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence ou d’un système d’imagerie par fluorescence. Les protéases caspase 3 et caspase 7 sont activées pendant la phase d’exécution de l’apoptose. Le substrat de la caspase 3 NucView 488 (fourni dans du DMSO ou du tampon phosphate [PBS] respectivement pour le kit de test EarlyTox Caspase-3/7-D NucView 488 et le kit de test EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488) est utilisé pour détecter l’activité des caspases 3 et 7 dans des cellules intactes, sans interférer avec l’activité de ces caspases. Le substrat est composé d'un colorant d’ADN fluorogène conjugué à la séquence de reconnaissance DEVD des caspases 3 et 7. Sous sa forme initiale non fluorescente, le substrat traverse la membrane plasmique et pénètre dans le cytoplasme. Dans les cellules apoptotiques, le substrat est clivé par les caspases 3 et 7, libérant ainsi un colorant à haute affinité pour l'ADN qui migre vers le noyau de la cellule, et colore l’ADN d'une fluorescence verte intense avec une excitation à 500 nm et une émission à 530 nm. Le colorant NucView 488 peut être fixé au formaldéhyde et est compatible avec l'immunocoloration ultérieure. Ce kit pour essai contient un réactif masquant facultatif pour atténuer la fluorescence de fond lorsque cela est nécessaire. La formulation de PBS est recommandée pour les cellules sensibles au DMSO.

Kit de test EarlyTox™ Glutathione

Ce kit permet de détecter un événement précoce de l'apoptose en mesurant la quantité de glutathion dans les cellules vivantes de mammifère à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence. Une baisse du taux de glutathion cellulaire (GSH), un antioxydant important dans les cellules de mammifère, se produit aux stades précoces de l’apoptose mitochondriale par l'efflux de GSH. Ce kit utilise du monochlorobimane (MCB), un colorant qui diffuse à l'intérieur des cellules et qui possède une affinité élevée pour le GSH, afin de détecter le taux de GSH cellulaire au cours d’un événement apoptotique. Sous sa forme non modifiée, le colorant n'émet quasiment pas de fluorescence. Après la réaction du colorant avec le GSH, catalysée par les enzymes glutathion-S-transférase (GST) endogènes, le colorant émet une fluorescence bleue, avec une excitation à 394 nm et une émission à 490 nm. L’intensité du signal fluorescent généré lors du test reflète la quantité de GSH présent dans les cellules.