Tests de détection des contaminants
Deux kits de test de détection des contaminants sont disponibles sous la marque Threshold : Test Immuno-ligand (ILA) Threshold® et test de l’ADN total Threshold®
Le test Immuno-ligand (ILA) Threshold permet de mesurer une grande gamme d’analytes tels que les protéines, les peptides, l’ADN spécifique d'une séquence et les micro-organismes lors des étapes de développement et de production biopharmaceutiques. Les échantillons peuvent inclure des surnageants de fermentation, des échantillons issus de procédés de purification et autres préparations biochimiques, mais aussi des sérums et autres liquides corporels. Les tests peuvent être développés sous format sandwich ou compétitif en fonction de la taille et des caractéristiques de l'analyte à mesurer.
Le test de l’ADN total Threshold détecte la présence d’ADN simple brin et la quantifie avec une sensibilité de l'ordre du picogramme. Contrairement aux techniques d’hybridation qui nécessitent des sondes ou des amorces d’ADN avec une séquence d’acides nucléiques spécifique, le test de l’ADN total Threshold détecte l’ADN avec une vaste spécificité de séquence. Le système Threshold peut ainsi détecter l’ADN provenant des cellules hôtes ainsi que tout autre ADN éventuellement introduit pendant le processus de fabrication biopharmaceutique. En outre, comme le test ne nécessite pas d’amorces ou de sondes à séquence spécifique, il peut facilement être utilisé avec différents échantillons purifiés à partir d’organismes hôtes différents.
Technologie des tests de détection des contaminants
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Test Immuno-ligand (ILA) Threshold®
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Lors de l'étape de réaction, les anticorps marqués, l’échantillon contenant l’analyte, la streptavidine et le conjugué d’anti-fluorescéine/uréase fournis dans le kit de détection ILA sont incubés pour former un complexe réactionnel. Comme la liaison se produit dans la solution, toutes les molécules sont maintenues dans leur conformation native pour garantir une mesure précise de l’analyte et 100% d’activité des anticorps. De la même manière, un complexe réactionnel se forme dans le test de l’ADN total lorsque la protéine biotinylée qui se fixe à l'ADN simple brin, et les anticorps anti-ADNsb conjugués à l’uréase se lient sans spécificité de séquence à l’ADN simple brin. Tous les composés de kit sont inclus dans le kit de test de l'ADN total.
Pendant l'étape de séparation, la grande affinité de la streptavidine pour la biotine est utilisée pour capturer et concentrer les complexes réactionnels sur une membrane biotinylée par une étape de filtration. Le poste de travail Threshold contient quatre unités de filtrations à 8 canaux avec une possibilité d’ajouter deux collecteurs auxiliaires pour une filtration simultanée totale de 96 échantillons.
Pendant le stade de détection, le complexe de réaction capturé sur la membrane est placé sur le lecteur Threshold contenant l’urée du substrat et le capteur LAPS. Dans le lecteur, l’urée est hydrolysée par uréase, ce qui produit un changement de pH dans un microvolume inférieur à 1 μl. L’activité de l’uréase de huit échantillons différents est détectée simultanément par le capteur pendant une mesure cinétique de 90 secondes. L’incroyable sensibilité, la précision et la reproductibilité du système Threshold® sont obtenues grâce à l’association de petits volumes d’échantillons avec le capteur à faible bruit.
Test Immuno-ligand (ILA) Threshold®
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Lors de l'étape de réaction, les anticorps marqués, l’échantillon contenant l’analyte, la streptavidine et le conjugué d’anti-fluorescéine/uréase fournis dans le kit de détection ILA sont incubés pour former un complexe réactionnel. Comme la liaison se produit dans la solution, toutes les molécules sont maintenues dans leur conformation native pour garantir une mesure précise de l’analyte et 100% d’activité des anticorps. De la même manière, un complexe réactionnel se forme dans le test de l’ADN total lorsque la protéine biotinylée qui se fixe à l'ADN simple brin, et les anticorps anti-ADNsb conjugués à l’uréase se lient sans spécificité de séquence à l’ADN simple brin. Tous les composés de kit sont inclus dans le kit de test de l'ADN total.
Pendant l'étape de séparation, la grande affinité de la streptavidine pour la biotine est utilisée pour capturer et concentrer les complexes réactionnels sur une membrane biotinylée par une étape de filtration. Le poste de travail Threshold contient quatre unités de filtrations à 8 canaux avec une possibilité d’ajouter deux collecteurs auxiliaires pour une filtration simultanée totale de 96 échantillons.
Pendant le stade de détection, le complexe de réaction capturé sur la membrane est placé sur le lecteur Threshold contenant l’urée du substrat et le capteur LAPS. Dans le lecteur, l’urée est hydrolysée par uréase, ce qui produit un changement de pH dans un microvolume inférieur à 1 μl. L’activité de l’uréase de huit échantillons différents est détectée simultanément par le capteur pendant une mesure cinétique de 90 secondes. L’incroyable sensibilité, la précision et la reproductibilité du système Threshold® sont obtenues grâce à l’association de petits volumes d’échantillons avec le capteur à faible bruit.
Test de l’ADN total Threshold®
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Lors de l'étape de réaction, les anticorps marqués, l’échantillon contenant l’analyte, la streptavidine et le conjugué d’anti-fluorescéine/uréase fournis dans le kit de détection ILA sont incubés pour former un complexe réactionnel. Comme la liaison se produit dans la solution, toutes les molécules sont maintenues dans leur conformation native pour garantir une mesure précise de l’analyte et 100% d’activité des anticorps. De la même manière, un complexe réactionnel se forme dans le test de l’ADN total lorsque la protéine biotinylée qui se fixe à l'ADN simple brin, et les anticorps anti-ADNsb conjugués à l’uréase se lient sans spécificité de séquence à l’ADN simple brin. Tous les composés de kit sont inclus dans le kit de test de l'ADN total.
Pendant l'étape de séparation, la grande affinité de la streptavidine pour la biotine est utilisée pour capturer et concentrer les complexes réactionnels sur une membrane biotinylée par une étape de filtration. Le poste de travail Threshold contient quatre unités de filtrations à 8 canaux avec une possibilité d’ajouter deux collecteurs auxiliaires pour une filtration simultanée totale de 96 échantillons.
Pendant le stade de détection, le complexe de réaction capturé sur la membrane est placé sur le lecteur Threshold contenant l’urée du substrat et le capteur LAPS. Dans le lecteur, l’urée est hydrolysée par uréase, ce qui produit un changement de pH dans un microvolume inférieur à 1 μl. L’activité de l’uréase de huit échantillons différents est détectée simultanément par le capteur pendant une mesure cinétique de 90 secondes. L’incroyable sensibilité, la précision et la reproductibilité du système Threshold® sont obtenues grâce à l’association de petits volumes d’échantillons avec le capteur à faible bruit.
Test de l’ADN total Threshold®
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Lors de l'étape de réaction, les anticorps marqués, l’échantillon contenant l’analyte, la streptavidine et le conjugué d’anti-fluorescéine/uréase fournis dans le kit de détection ILA sont incubés pour former un complexe réactionnel. Comme la liaison se produit dans la solution, toutes les molécules sont maintenues dans leur conformation native pour garantir une mesure précise de l’analyte et 100% d’activité des anticorps. De la même manière, un complexe réactionnel se forme dans le test de l’ADN total lorsque la protéine biotinylée qui se fixe à l'ADN simple brin, et les anticorps anti-ADNsb conjugués à l’uréase se lient sans spécificité de séquence à l’ADN simple brin. Tous les composés de kit sont inclus dans le kit de test de l'ADN total.
Pendant l'étape de séparation, la grande affinité de la streptavidine pour la biotine est utilisée pour capturer et concentrer les complexes réactionnels sur une membrane biotinylée par une étape de filtration. Le poste de travail Threshold contient quatre unités de filtrations à 8 canaux avec une possibilité d’ajouter deux collecteurs auxiliaires pour une filtration simultanée totale de 96 échantillons.
Pendant le stade de détection, le complexe de réaction capturé sur la membrane est placé sur le lecteur Threshold contenant l’urée du substrat et le capteur LAPS. Dans le lecteur, l’urée est hydrolysée par uréase, ce qui produit un changement de pH dans un microvolume inférieur à 1 μl. L’activité de l’uréase de huit échantillons différents est détectée simultanément par le capteur pendant une mesure cinétique de 90 secondes. L’incroyable sensibilité, la précision et la reproductibilité du système Threshold® sont obtenues grâce à l’association de petits volumes d’échantillons avec le capteur à faible bruit.
Ressources sur les tests de détection des contaminants
Note d'application
Optimisation du marquage des protéines
Optimizing the labeling of proteins
Le test à immuno-ligand (ILA) Threshold® adapte les réactifs utilisés dans les tests ELISA, RIA ou de radiorécepteurs au système Threshold en fixant de manière covalente la biotine ou des marqueurs fluorescéine…
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Note d'application
Quantification de l’ADN résiduel dans les produits biopharmaceutiques finaux à l’aide du système de test de l’ADN total Threshold. Validation des tests et détermination de la limite de détection
Quantitation of residual DNA in final product biopharmaceuticals using the Threshold Total DNA assay system. Assay validation and determination of detection limit
La FDA recommande que tous les tests de contrôle qualité utilisés pour la commercialisation des produits biopharmaceutiques respectent les bonnes pratiques de fabrication (BPF) indiquées dans le Code de la Federal…
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Note d'application
Méthode d’extraction de l’ADN sans phénol
A phenol-free DNA extraction method
Un procédé d’extraction de l’ADN a été évalué au moyen d’un kit d’extraction déjà commercialisé pour le prétraitement d’échantillons biopharmaceutiques à analyser avec le test de l’ADN total Threshold®. Ce…
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Note d'application
Test ADN à séquence spécifique
Sequence-Specific DNA Assay
Des séquences d’ADN spécifiques peuvent être mesurées avec le système Threshold®. Des sondes d’oligonucléotides biotinylées et fluorescéinées spécifiques à la séquence cible à…
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Note d'application
Test de contaminant de protéine G
Protein G contaminant assay
La protéine G, purifiée à partir de la paroi cellulaire de streptocoques du groupe G, est une protéine de 30 000-35 000 Dalton qui se fixe à la région Fc des anticorps1. Cette caractéristique est utilisée pour…
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Note d'application
Test de contaminant de protéine A
Protein A contaminant assay
La protéine A, purifiée à partir de la paroi cellulaire de S. aureus, est une protéine de 42 000 Dalton. Elle possède quatre sites de liaison pour la région Fc des anticorps, dont seulement deux peuvent être occupés…
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Note d'application
Test de contaminant de transferrine humaine
Contaminant human transferrin assay
La transferrine humaine est une glycoprotéine de 80 000 Dalton présente dans le sérum humain qui facilite le transport du fer entre les cellules. La forme pauvre en fer, l’apo-transferrine, s’associe au Fe2+…
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Note d'application
Test de contaminant de protéine dérivée d’une cellule hôte
Contaminant host cell-derived protein assay
Les polypeptides autres que le produit biologique d’intérêt qui sont produits par la cellule hôte pendant la mise en culture ou la fermentation des cellules (« protéine dérivée d’une cellule hôte » ou « HCP ») peuvent provoquer…
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Note d'application
Test de contaminant de la BSA
Contaminant BSA assay
L’albumine sérique de bovin (BSA), une protéine de 63 000 Dalton, est un composant majeur du sérum bovin. Le sérum de veau fœtal contenant de la BSA peut être utilisé dans les milieux de culture des cellules de mammifères pour…
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Note d'application
Test de contaminant de la transferrine bovine
Contaminant bovine transferrin assay
La transferrine bovine, une glycoprotéine de 76 000 Dalton, est l’un des constituants du sérum bovin. La transferrine présente dans le sérum peut être associée aux ions fer. La forme saturée en fer est…
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Note d'application
Test de contaminant de l’IgG bovine
Contaminant bovine IgG assay
L’IgG bovine, une protéine de 160 000 Dalton, est l’un des constituants du sérum bovin. Le sérum de veau fœtal contenant de l’IgG bovine est fréquemment utilisé dans les milieux de culture des cellules de mammifères pour…
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Note d'application
Application d’un test immunologique rapide (FAST ILA) dans une culture/fermentation cellulaire et conception d’un procédé à l’aide du système Threshold
Applications of rapid immunoassays (FAST ILA) in cell culture/fermentation and process development using the Threshold System
La mesure précise de la concentration d’un produit biologique est importante dans la surveillance des bioréacteurs/fermenteurs, le traitement en aval et le contrôle qualité des produits finis. Actuellement…
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Note d'application
Qualification ADNase 1 et traitement des échantillons
DNAse I qualification and sample treatment
Le test de l’ADN total Threshold quantifie l’ADN contaminant dans les médicaments biopharmaceutiques. L'ADNase 1 peut être utilisée avec le test de l’ADN total pour deux objectifs : Pour valider que…