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Tests de détection des contaminants

Deux kits de test de détection des contaminants sont disponibles sous la marque Threshold : Test Immuno-ligand (ILA) Threshold® et test de l’ADN total Threshold®

Le test Immuno-ligand (ILA) Threshold permet de mesurer une grande gamme d’analytes tels que les protéines, les peptides, l’ADN spécifique d'une séquence et les micro-organismes lors des étapes de développement et de production biopharmaceutiques. Les échantillons peuvent inclure des surnageants de fermentation, des échantillons issus de procédés de purification et autres préparations biochimiques, mais aussi des sérums et autres liquides corporels. Les tests peuvent être développés sous format sandwich ou compétitif en fonction de la taille et des caractéristiques de l'analyte à mesurer.

Le test de l’ADN total Threshold détecte la présence d’ADN simple brin et la quantifie avec une sensibilité de l'ordre du picogramme. Contrairement aux techniques d’hybridation qui nécessitent des sondes ou des amorces d’ADN avec une séquence d’acide nucléique spécifique, le test de l’ADN total Threshold détecte l’ADN avec une spécificité étendue par rapport à la séquence. Le système Threshold peut ainsi détecter l’ADN provenant des cellules hôtes ainsi que tout autre ADN éventuellement introduit pendant le processus de fabrication biopharmaceutique. En outre, comme le test ne nécessite pas d’amorces ou de sondes à séquence spécifique, il peut facilement être utilisé avec différents échantillons purifiés à partir d’organismes hôtes différents.

Technologie des tests de détection des contaminants

  • Test Immuno-ligand (ILA) Threshold®

    Test Immuno-ligand (ILA) Threshold

    Veuillez cliquer ici pour agrandir l’image.

    Lors de l'étape de réaction, les anticorps marqués, l’échantillon contenant l’analyte, la streptavidine et le conjugué d’anti-fluorescéine/uréase fournis dans le kit de détection ILA sont incubés pour former un complexe réactionnel. Comme la liaison se produit dans la solution, toutes les molécules sont maintenues dans leur conformation native pour garantir une mesure précise de l’analyte et 100% d’activité des anticorps. De la même manière, un complexe réactionnel se forme dans le test de l’ADN total lorsque la protéine biotinylée qui se fixe à l'ADN simple brin, et les anticorps anti-ADNsb conjugués à l’uréase se lient sans spécificité de séquence à l’ADN simple brin. Tous les composés de kit sont inclus dans le kit de test de l'ADN total.

    Pendant l'étape de séparation, la grande affinité de la streptavidine pour la biotine est utilisée pour capturer et concentrer les complexes réactionnels sur une membrane biotinylée par une étape de filtration. Le poste de travail Threshold contient quatre unités de filtrations à 8 canaux avec une possibilité d’ajouter deux collecteurs auxiliaires pour une filtration simultanée totale de 96 échantillons.

    Pendant le stade de détection, le complexe de réaction capturé sur la membrane est placé sur le lecteur Threshold contenant l’urée du substrat et le capteur LAPS. Dans le lecteur, l’urée est hydrolysée par uréase, ce qui produit un changement de pH dans un microvolume inférieur à 1 μl. L’activité de l’uréase de huit échantillons différents est détectée simultanément par le capteur pendant une mesure cinétique de 90 secondes. L’incroyable sensibilité, la précision et la reproductibilité du système Threshold® sont obtenues grâce à l’association de petits volumes d’échantillons avec le capteur à faible bruit.

    Test de l’ADN total Threshold®

    Test de l’ADN total Threshold

    Veuillez cliquer ici pour agrandir l’image.

    Lors de l'étape de réaction, les anticorps marqués, l’échantillon contenant l’analyte, la streptavidine et le conjugué d’anti-fluorescéine/uréase fournis dans le kit de détection ILA sont incubés pour former un complexe réactionnel. Comme la liaison se produit dans la solution, toutes les molécules sont maintenues dans leur conformation native pour garantir une mesure précise de l’analyte et 100% d’activité des anticorps. De la même manière, un complexe réactionnel se forme dans le test de l’ADN total lorsque la protéine biotinylée qui se fixe à l'ADN simple brin, et les anticorps anti-ADNsb conjugués à l’uréase se lient sans spécificité de séquence à l’ADN simple brin. Tous les composés de kit sont inclus dans le kit de test de l'ADN total.

    Pendant l'étape de séparation, la grande affinité de la streptavidine pour la biotine est utilisée pour capturer et concentrer les complexes réactionnels sur une membrane biotinylée par une étape de filtration. Le poste de travail Threshold contient quatre unités de filtrations à 8 canaux avec une possibilité d’ajouter deux collecteurs auxiliaires pour une filtration simultanée totale de 96 échantillons.

    Pendant le stade de détection, le complexe de réaction capturé sur la membrane est placé sur le lecteur Threshold contenant l’urée du substrat et le capteur LAPS. Dans le lecteur, l’urée est hydrolysée par uréase, ce qui produit un changement de pH dans un microvolume inférieur à 1 μl. L’activité de l’uréase de huit échantillons différents est détectée simultanément par le capteur pendant une mesure cinétique de 90 secondes. L’incroyable sensibilité, la précision et la reproductibilité du système Threshold® sont obtenues grâce à l’association de petits volumes d’échantillons avec le capteur à faible bruit.

Ressources sur les tests de détection des contaminants

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