Vue d’ensemble des tests Enzymes – IMAP
Basé sur l'interaction spécifique haute affinité des groupes phosphate avec les nanoparticules contenant un métal trivalent (billes), le test IMAP est une plateforme générique sans anticorps permettant d'évaluer l'activité des kinases, phosphatases et phosphodiestérases. Une réaction enzymatique se produit en utilisant un substrat marqué par fluorescence. L'ajout du système de liaison IMAP arrête la réaction enzymatique et initie la liaison des billes aux substrats phosphorylés. La liaison du substrat aux billes, qui est corrélée à l'activité enzymatique, peut être détectée en utilisant la mesure FP ou TR-FRET.
Système de liaison progressive IMAP
Substrats IMAP
Données sur les tests IMAP
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Données sur les échantillons IMAP FP : Courbe de dilution ROCKII
Courbes de dilution enzymatique pour ROCKII dans de la BSA et dans un tampon de réaction Tween IMAP à l'aide du système de liaison progressive. Conditions de réaction : Kinase ROCKII (Upstate : 14-451) comme indiqué, substrat dérivé de FAM-S6 100 nm (5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH, R7184), ATP 100 µm. Conditions de la solution de liaison IMAP : 100 % de tampon A de liaison, réactif de liaison progressive 1:400.
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Détection FP par rapport à TR-FRET
Inhibition de l'Akt avec staurosporine : comparaison de la détection IMAP TR-FRET (en haut) et de la détection IMAP FP (en bas). Conditions de réaction : Kinase de l'Akt (0,1 u/ml, Upstate : 14-276), 300 nm, 1 µm, 3 µm FAM-Crosstide (5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH, R7110), ATP 10 µm, staurosporine comme indiqué. Solution de liaison IMAP : 40 % de tampon A de liaison, 60 % de tampon B de liaison, réactif de liaison progressive 1:400.
Technologie des tests Enzyme – IMAP
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Tests génériques de kinase et phosphatase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction kinase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
Tests génériques de kinase et phosphatase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction kinase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
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Tests génériques de kinase et phosphatase TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de kinase en utilisant un peptide ou une protéine marqués par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Tests génériques de kinase et phosphatase TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de kinase en utilisant un peptide ou une protéine marqués par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Ressources sur les tests Enzyme – IMAP
Livre électronique
Tests optimisés pour la recherche de pointe
Optimized Assays for Breakthrough Research
La recherche en biologie a été largement simplifiée par les kits de test, instruments et protocoles d’analyse normalisés commercialisés par les fabricants.
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Tests multiplex et en cascade avec la plate-forme de polarisation de fluorescence IMAP
Multiplexing and Cascade Assays with the IMAP Fluorescence Polarization Platform
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Affiche scientifique
Tests multiplex dans IMAP en utilisant le système de liaison progressive
Multiplex Assays in IMAP using the Progressive Binding System
La plateforme de tests de fluorescence polarisée (FP) IMAP est un système homogène générique pouvant s’appliquer à un grand nombre d’enzymes, notamment les protéines kinases. IMAP se base sur la haute affin…
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Affiche scientifique
Tests de polarisation de fluorescence des protéases avec la plate-forme IMAP
Fluorescence Polarization Assays of Proteases with the IMAP Platform
Parcourez ce document pour découvrir la plateforme de tests par polarisation de la fluorescence IMAP qui est un système sans anticorps applicable à un grand nombre de protéines kinases.
Fiche technique
Technologie IMAP pour kinases, phosphatases et phosphodiestérases
IMAP Technology for Kinases, Phosphatases and Phosphodiesterases
Obtenez des informations sur la technologie IMAP exclusive qui fournit un test homogène non radioactif pour l’activité des kinases.
Note d'application
Tests de kinase IMAP FP sur le lecteur de microplaques multimode SpectraMax M5
IMAP FP kinase assays on the SpectraMax M5 Multi-Mode Microplate Reader
Les protéines kinases sont essentielles à la régulation de nombreux processus cellulaires. Depuis quelques années, elles forment l’une des principales classes de cellules effectrices pour le cancer et plusieurs...
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Note d'application
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IMAP phosphodiesterase assays on SpectraMax Multi-Mode Microplate Readers
Les PDE, phosphodiestérases nucléotidiques cycliques, forment un groupe d’enzymes qui dégradent la liaison phosphodiester du cAMP et du cGMP, les messagers secondaires participant à une diversité de…
Produits et services compatibles avec les tests Enzyme – IMAP
Applications particulières
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