Vue d’ensemble des tests Enzymes – IMAP

Basé sur l'interaction spécifique haute affinité des groupes phosphate avec les nanoparticules contenant un métal trivalent (billes), le test IMAP est une plateforme générique sans anticorps permettant d'évaluer l'activité des kinases, phosphatases et phosphodiestérases. Une réaction enzymatique se produit en utilisant un substrat marqué par fluorescence. L'ajout du système de liaison IMAP arrête la réaction enzymatique et initie la liaison des billes aux substrats phosphorylés. La liaison du substrat aux billes, qui est corrélée à l'activité enzymatique, peut être détectée en utilisant la mesure FP ou TR-FRET.

Système de liaison progressive IMAP

Le système de liaison progressive IMAP permet aux chercheurs d'optimiser leurs conditions de test FP et TR-FRET pour chaque substrat utilisé. Le système est composé d'un tampon A et d'un tampon B de liaison progressive, et d'un réactif de liaison progressive. Les deux tampons et le réactif peuvent être combinés dans des proportions différentes en fonction du caractère acide du substrat choisi, des concentrations souhaitées de l'ATP et des paramètres de fond.

Substrats IMAP

Molecular Devices propose une large gamme de substrats et calibreurs validés. Les substrats peuvent être utilisés avec les enzymes pour lesquels ils ont été validés à l'origine, ou comme substrats potentiels pour d'autres enzymes.
• Les substrats IMAP validés avec des conditions de liaison optimisées garantissent les meilleures performances lors de l'utilisation de la plateforme IMAP.
• Les substrats sont disponibles en deux tailles et peuvent être utilisés avec IMAP FP et IMAP TR-FRET.
• Des dizaines de substrats différents ont été validés avec plus de 100 enzymes. De nombreux substrats sont disponibles avec un marqueur fluorescent rouge ou vert, permettant le multiplexage et offrant un moyen de gérer les problèmes liés à l'auto-fluorescence du composé.

Données sur les tests IMAP

  • Données sur les échantillons IMAP : courbe de dilution ROCKII

    Données sur les échantillons IMAP FP : Courbe de dilution ROCKII

    Courbes de dilution enzymatique pour ROCKII dans de la BSA et dans un tampon de réaction Tween IMAP à l'aide du système de liaison progressive. Conditions de réaction : Kinase ROCKII (Upstate : 14-451) comme indiqué, substrat dérivé de FAM-S6 100 nm (5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH, R7184), ATP 100 µm. Conditions de la solution de liaison IMAP : 100 % de tampon A de liaison, réactif de liaison progressive 1:400.

  • Détection FP par rapport à TR-FRET

    Inhibition de l'Akt avec staurosporine : comparaison de la détection IMAP TR-FRET (en haut) et de la détection IMAP FP (en bas). Conditions de réaction : Kinase de l'Akt (0,1 u/ml, Upstate : 14-276), 300 nm, 1 µm, 3 µm FAM-Crosstide (5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH, R7110), ATP 10 µm, staurosporine comme indiqué. Solution de liaison IMAP : 40 % de tampon A de liaison, 60 % de tampon B de liaison, réactif de liaison progressive 1:400.

    Détection FP vs. TR-FRET

Technologie des tests Enzyme – IMAP

  • Tests génériques de kinases et phosphatases IMAP FP

    Tests génériques de kinase et phosphatase IMAP FP

    Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction kinase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.

  • Tests génériques de kinases et phosphatases TR-FRET

    Tests génériques de kinase et phosphatase TR-FRET

    Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de kinase en utilisant un peptide ou une protéine marqués par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.

  • Tests génériques de phosphodiestérases IMAP FP

    Tests génériques de phosphodiestérase IMAP FP

    Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.

  • Tests génériques de phosphodiestérases IMAP TR-FRET

    Tests génériques de phosphodiestérase IMAP TR-FRET

    Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.

Options de commande des tests Enzyme – IMAP

Kit de test IMAP

Kit démo d'évaluation IMAP

Kit démo d'évaluation IMAP
Kit IMAP 800 points de données optimisé comprenant des calibreurs (peptides phosphorylés et non phosphorylés) pour réaliser une courbe d'étalonnage pour la détection FP ou TR-FRET.

#R8166

$730.00 USD

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Kit d’évaluation IMAP TR-FRET avec système de liaison progressive

Kit d'évaluation IMAP TR-FRET avec système de liaison progressive
Protocole 800 points de données optimisé pour réaliser un test IMAP avec système de liaison progressive. Une kinase et un substrat supplémentaires sont nécessaires.

#R8161

$730.00 USD

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Kit d’évaluation IMAP FR PDE

Kits d'évaluation IMAP FP PDE

#R8175

$1,338.00 USD

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Kit d’évaluation IMAP TR-FRET PDE (avec substrats AMPc et GMPc)

Kits d'évaluation IMAP TR-FRET PDE
Comprend un protocole optimisé, et des substrats cAMP et cGMP. Le client doit utiliser ses propres enzymes PDE.

#R8176

$1,338.00 USD

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Ressources sur les tests Enzyme – IMAP

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Produits et services compatibles avec les tests Enzyme – IMAP

Applications particulières

Tests génériques de kinases et phosphatases IMAP FP

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Tests génériques de phosphodiestérases IMAP FP

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