Vue d’ensemble des tests Enzymes – IMAP
Basé sur l'interaction spécifique haute affinité des groupes phosphate avec les nanoparticules contenant un métal trivalent (billes), le test IMAP est une plateforme générique sans anticorps permettant d'évaluer l'activité des kinases, phosphatases et phosphodiestérases. Une réaction enzymatique se produit en utilisant un substrat marqué par fluorescence. L'ajout du système de liaison IMAP arrête la réaction enzymatique et initie la liaison des billes aux substrats phosphorylés. La liaison du substrat aux billes, qui est corrélée à l'activité enzymatique, peut être détectée en utilisant la mesure FP ou TR-FRET.
Système de liaison progressive IMAP
Substrats IMAP
Données sur les tests IMAP
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Données sur les échantillons IMAP FP : Courbe de dilution ROCKII
Courbes de dilution enzymatique pour ROCKII dans de la BSA et dans un tampon de réaction Tween IMAP à l'aide du système de liaison progressive. Conditions de réaction : Kinase ROCKII (Upstate : 14-451) comme indiqué, substrat dérivé de FAM-S6 100 nm (5FAM-AKRRRLSSLRA-COOH, R7184), ATP 100 µm. Conditions de la solution de liaison IMAP : 100 % de tampon A de liaison, réactif de liaison progressive 1:400.
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Détection FP par rapport à TR-FRET
Inhibition de l'Akt avec staurosporine : comparaison de la détection IMAP TR-FRET (en haut) et de la détection IMAP FP (en bas). Conditions de réaction : Kinase de l'Akt (0,1 u/ml, Upstate : 14-276), 300 nm, 1 µm, 3 µm FAM-Crosstide (5FAM-GRPRTSSFAEG-COOH, R7110), ATP 10 µm, staurosporine comme indiqué. Solution de liaison IMAP : 40 % de tampon A de liaison, 60 % de tampon B de liaison, réactif de liaison progressive 1:400.
Technologie des tests Enzyme – IMAP
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Tests génériques de kinase et phosphatase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction kinase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
Tests génériques de kinase et phosphatase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction kinase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP FP
Principes IMAP en utilisant la mesure FP : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Le petit substrat fluorescent phosphorylé se lie aux grandes nanoparticules à base de M(III), ce qui réduit la vitesse de rotation du substrat et augmente par conséquent sa polarisation.
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Tests génériques de kinase et phosphatase TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de kinase en utilisant un peptide ou une protéine marqués par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Tests génériques de kinase et phosphatase TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de kinase en utilisant un peptide ou une protéine marqués par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Tests génériques de phosphodiestérase IMAP TR-FRET
Principes IMAP en utilisant la mesure TR-FRET : la solution de liaison est ajoutée après la réaction de phosphodiestérase en utilisant un peptide marqué par fluorescence. Dans ce système, la nanoparticule est dopée avec une molécule donneuse de terbium (Tb). En se liant à des nanoparticules à base de M(III), le substrat fluorescent phosphorylé se rapproche du Tb-Donneur, ce qui permet la mesure TR-FRET entre le Tb-Donneur et le substrat fluorescent phosphorylé.
Ressources sur les tests Enzyme – IMAP
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Les protéines kinases sont essentielles à la régulation de nombreux processus cellulaires. Depuis quelques années, elles forment l’une des principales classes de cellules effectrices pour le cancer et plusieurs...
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Fiche technique
Technologie IMAP pour kinases, phosphatases et phosphodiestérases
IMAP Technology for Kinases, Phosphatases and Phosphodiesterases
Obtenez des informations sur la technologie IMAP exclusive qui fournit un test homogène non radioactif pour l’activité des kinases.
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Multiplexing and Cascade Assays with the IMAP Fluorescence Polarization Platform
Ce document met en évidence le multiplexage avec le système de liaison progressive IMAP, et les tests IMAP en cascade, ou couplés, permettant aux chercheurs HTS d’optimiser leurs tests pour chaque application…
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Produits et services compatibles avec les tests Enzyme – IMAP
Applications particulières
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