Vue d’ensemble des kits de test FLIPR de mesure du potentiel membranaire
Chaque kit de test homogène utilise une combinaison brevetée de colorant indicateur et quencher pour maximiser l’applicabilité de lignée cellulaire/canal/composé, tout en éliminant les sources de variabilité des données . Cette formule unique réagit 10 fois plus vite et possède une plus grande stabilité de température que les colorants traditionnels, fournissant ainsi des données de criblage de grande qualité indiquant une bonne corrélation avec les tests utilisant la méthode patch-clamp manuelle.
L’activité du canal ionique étant très sensible et pouvant éventuellement être impactée par des changements chimiques subtils, deux kits de test de potentiel membranaire FLIPR® (rouge et bleu) sont disponibles pour sélectionner les conditions optimales de vos cibles de canal ionique. Les deux formulations s’appuient sur la technologie brevetée de quencher de Molecular Devices pour augmenter les fenêtres de signal et produire des Z scores acceptables afin de cribler de nombreuses cibles, y compris les canaux de ligands, de nucléotides cycliques, TRP et dépendants du voltage.
Contrairement aux colorants traditionnels comme le DiBAC, le kit FLIPR de mesure du potentiel membranaire détecte les changements de gradients bidirectionnels pour vous permettre de suivre les variables et les conditions de contrôle au cours d’une seule expérience. Nous vous recommandons d’évaluer les deux kits de mesure afin de déterminer la formulation la mieux adaptée à votre cible.
Données sur les kits de test du potentiel membranaire FLIPR
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Comparaison des données sur le kit de test patch-clamp à celles du kit de mesure du potentiel membranaire FLIPR
La méthode patch-clamp manuelle dispose d’une capacité de détection de réactions rapides, permettant ainsi la détection des changements très rapides du potentiel membranaire. La comparaison des données générées par les kits de mesure de potentiel membranaire FLIPR avec les résultats obtenus par la méthode patch-clamp manuelle indique une bonne corrélation (Figures 1 et 2). On observe à la fois l’ouverture et la fermeture du canal ionique, contrairement au DiBAC qui ne montre que les modifications unidirectionnelles du potentiel membranaire (Figure 3).
Comparaison entre la méthode patch-clamp (mV) et les tests de potentiel membranaire FLIPR (fluorescence) sur des cellules CHO exprimant un canal K+ dépendant du voltage. Données fournies par Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.
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Changement de fluorescence par rapport au changement de potentiel membranaire
Corrélation des modifications du potentiel membranaire avec les tests de fluorescence sur l’instrument FLIPR : Cellules CHO transfectées avec le canal K+ exposées à diverses concentrations de potassium. Données fournies par Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.
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Comparaison de canaux calciques activés par fixation d’un ligand
Comparaison entre le kit de test de potentiel membranaire FLIPR, les tests DiBAC et Fluo-3 sur des canaux Ca2+ activés par la fixation d’un ligand. Données fournies par Michael Xie, Millenium Pharmaceuticals.
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Deux options de formulation de désactivation pour le kit de potentiel membranaire
L’activité du canal ionique étant sensible aux interférences, et les interférences chimiques avec un canal ionique en particulier étant hautement imprévisibles, les kits de mesure de potentiel membranaire FLIPR sont disponibles en deux formulations. Les deux formulations allient les avantages du colorant indicateur de potentiel membranaire exclusif à notre technologie de désactivation brevetée. Une formulation utilise un quencher bleu et l’autre un quencher rouge. Nous vous recommandons d’évaluer les deux versions pour chaque cible/lignée cellulaire individuelle afin d'identifier la formulation qui vous procurera des performances optimales.
Modulation d’un canal Nav1.5 dans des cellules CHL-hH1 par la tétrodotoxine. Dans ce test, 30 mM de vératridine sont utilisés pour maintenir le canal sodique ouvert. La modulation se produit lorsque la concentration de tétrodoxine augmente. Un afflux rapide de Na+ dans la cellule se produit, dépolarisant la membrane et entraînant une augmentation de la fluorescence. Dans ce test, le kit rouge de potentiel membranaire a indiqué une fenêtre de signal plus large et un facteur Z plus grand.
Technologie des kits de test FLIPR de mesure du potentiel membranaire
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L’intensité de la fluorescence change avec l’augmentation ou la diminution du potentiel membranaire cellulaire.
Les kits de test de potentiel membranaire FLIPR détectent les modulations de canal ionique en augmentant ou diminuant le signal de fluorescence tandis que le potentiel membranaire cellulaire se modifie. Le signal fluorescent augmente en intensité pendant la dépolarisation de la membrane tandis que le colorant suit les ions chargés positivement à l’intérieur de la cellule. Pendant l’hyperpolarisation de la membrane, le signal fluorescent diminue en intensité tandis que le colorant suit les ions chargés positivement à l’extérieur de la cellule. Les kits sont spécialement adaptés pour une utilisation avec la capacité simultanée de pipettage et de lecture des lecteurs de microplaques FLIPR® Tetra et FlexStation® 3 pour capturer des cinétiques rapides associées à l’activation des canaux ioniques.
Les kits disposent d’un colorant quencher pour atténuer le bruit de fond en fluorescence et améliorer le rapport signal/bruit La technologie brevetée de désactivation (numéro de brevet américain 6 420 183, numéro de brevet OEB 0 906 572) est proposée en exclusivité par Molecular Devices aux développeurs de médicaments ainsi qu’aux chercheurs en sciences de la vie par le biais des kits de test FLIPR disponibles à l’achat.
Ressources sur les kits de test FLIPR de mesure du potentiel membranaire
Livre électronique
Tests optimisés pour la recherche de pointe
Optimized Assays for Breakthrough Research
La recherche en biologie a été largement simplifiée par les kits de test, instruments et protocoles d’analyse normalisés commercialisés par les fabricants.
Affiche scientifique
Conception du test avec le kit de mesure du potentiel membranaire FLIPR TETRA™ au format 384 puits et 1536 puits
FLIPR TETRA™ Membrane Potential Kit Assay Development in 384-Well and 1536 -Well Format
Parcourez cette affiche pour obtenir des détails sur le kit de test FLIPR TETRA de mesure du potentiel membranaire et la comparaison des formats de 384 à 1536 puits.
Fiche technique
Kits FLIPR de mesure du potentiel membranaire
FLIPR Membrane Potential Assay Kits
Obtenez cette fiche technique pour découvrir les kits de test FLIPR pour la mesure du potentiel membranaire qui permettent un haut débit tout en montrant une bonne corrélation avec les données de patch-clamp manuel.
Note d'application
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Measuring Membrane Potential using the FLIPR® Membrane Potential Assay Kit on Fluorometric Imaging Plate Reader (FLIPR) Systems
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Development of a Cav 1.3 channel assay using optogenetic methods on the FLIPR Tetra System
Dans cette étude, nous démontrons la nouvelle utilité des outils optogénétiques de contrôle du potentiel membranaire de façon réversible et précise pour le criblage du canal calcique dépendant de l’état…
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