Kit pour essai de captage de transporteurs de neurotransmetteurs
Jusqu’à récemment, des composés radiomarqués étaient employés pour mesurer l’assimilation des transporteurs de la sérotonine, de la norépinéphrine et de la dopamine. Avec l’introduction du kit de test d’assimilation des transporteurs des neurotransmetteurs, vous pouvez désormais bénéficier d’un outil permettant d'évaluer la cinétique d'assimilation de ces trois neurotransmetteurs clés dans des cellules vivantes.
- Ce test fluorescent et homogène sur cellules vivantes remplace les tests radioactifs, diminuant ainsi les frais d’élimination et les risques pour la santé liés à l'utilisation de molécules radiomarquées.
- Le format de ce test homogène en une étape permet son automatisation et le criblage haut débit.
- Les deux possibilités de paramétrage de test procurent une plus grande flexibilité : mode point final pour les applications haut débit, ou mode cinétique en temps réel pour les études des mécanismes.
Données sur le kit de test de recapture de transporteurs de neurotransmetteurs
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Inhibition de la nisoxétine dans les cellules HEK-hSERT
Des cellules HEK exprimant des SERT humains de manière stable ont été étalées à raison de 10 000 cellules par puits dans des plaques à 384 puits enduites de poly-D-lysine et incubées pendant une nuit. Le milieu a été retiré et puis les cellules incubées avec la nisoxétine (Ki publié = 383 nM) dans du HBSS/BSA 0,1 % pendant 10 minutes à 37 °C avant l’ajout de colorant. Le test a été réalisé conformément au protocole expérimental et la fluorescence mesurée sur le lecteur FlexStation® 3 de Molecular Devices en mode cinétique pendant 30 minutes.
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Souplesse d'ensemencement
Des cellules HEK exprimant le transporteur NET humain de manière stable ont été étalées soit le soir avant le test (cercles bleus ouverts), soit le jour du test (carrés noirs pleins), à raison de 20 000 cellules par puits dans des plaques à 384 puits enduites de poly-D-lysine, et incubées pendant 3 heures afin de permettre leur adhérence. Le milieu a été retiré puis les cellules incubées avec la nomifensine dans du HBSS/BSA 0,1 % pendant 10 minutes à 37 °C avant l’ajout de colorant. Le test a été lu sur le lecteur FlexStation® 3 en mode cinétique pendant 30 minutes. La courbe d’inhibition est exprimée en tant qu’aire sous la courbe.
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Corrélation de la CI50 pour DAT, NET et SERT (résultats client)
Des cellules exprimant les transporteurs DAT, NET et SERT humains de manière stable ont été étalées à raison de 60 000 cellules/puits (plaque à 96 puits), incubées pendant une nuit, puis traitées avec 8 inhibiteurs connus différents. Après 10 minutes, la solution de colorant a été ajoutée et le test a été réalisé conformément au protocole décrit ci-dessus. Le log Ki a été calculé à partir des données obtenues à l’aide de l’équation de Cheng-Prusoff et la corrélation avec des valeurs Ki connues pour les trois transporteurs a été déterminée. Les coefficients de corrélation R2 pour chaque transporteur sont représentés sur le graphique. Le coefficient de corrélation (valeur R2) pour l’ensemble des 24 valeurs était de 0,91.
Technologie du kit de test de recapture de neurotransmetteurs par des transporteurs
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Principe du test-neurotransmetteur
Le kit de test d’assimilation des transporteurs des neurotransmetteurs utilise un substrat fluorescent qui est capté spécifiquement par les transporteurs des neurotransmetteurs des cellules de la même manière que les amines biogènes neurotransmetteurs et entraîne une augmentation de l’intensité de la fluorescence intracellulaire qui peut être mesurée en temps réel à l’aide d’un lecteur de microplaques à lecture par le bas. Au cours de cette procédure pratique et sans étape de lavage, les cellules sont incubées avec le réactif du kit puis transférées vers le lecteur de plaques pour évaluation. Ce test est parfaitement adapté aux travaux de recherche fondamentale, au développement de tests et au criblage haut-débit aussi bien dans des laboratoires académiques que des sociétés biotech ou pharmaceutiques.
Flux de travail-neurotransmetteur
Pour en savoir plus, veuillez consulter la notice du kit de test de recapture de neurotransmetteurs par des transporteurs, disponible dans la Base de connaissances de Molecular Devices.
Ressources sur le kit de test de recapture de neurotransmetteurs par des transporteurs
Livre électronique
Tests optimisés pour la recherche de pointe
Optimized Assays for Breakthrough Research
La recherche en biologie a été largement simplifiée par les kits de test, instruments et protocoles d’analyse normalisés commercialisés par les fabricants.
Fiche technique
Kit pour essai de captage de transporteurs de neurotransmetteurs
Neurotransmitter Transporter Uptake Assay Kit
Les transporteurs des neurotransmetteurs sont devenus des cibles pharmaceutiques importantes, car ils jouent un rôle essentiel dans la dépression et les maladies neurodégénératives (MND) telles que la maladie d’Alzheimer et la maladie de Parkins…
Affiche scientifique
Test d’assimilation des transporteurs des neurotransmetteurs par fluorescence
A Fluorescence-Based Neurotransmitter Transporter Uptake Assay
Ici, nous présentons un test homogène pour l’activité des transporteurs de la noradrénaline, de la dopamine et de la sérotonine en se basant sur la recapture cellulaire d’un colorant fluorescent couplé à un colorant de masquage exclusif…
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Affiche scientifique
Essai par fluorescence de reprélèvement des transporteurs de neurotransmetteurs dans des cultures neuronales primaires
Fluorescence-Based Neurotransmitter Transporter Uptake Assay in Primary Neuronal Cultures
Lisez ce document PDF pour découvrir comment le kit de test par fluorescence est utile à la mesure de l’activité d’absorption des transporteurs de neurotransmetteurs dans des lignées cellulaires exprimant de façon stable le DAT humain, NE…
