Kit QBT de test de captage des acides gras
Les protocoles traditionnels de suivi du captage des acides gras à l’aide de la radioactivité nécessitent souvent une lyse des cellules et un traitement à très basse température. Ils sont donc coûteux, lents et inadaptés au criblage à haut débit. Les protocoles utilisant la fluorescence nécessitent généralement l’utilisation d’instruments de tri de cellules activés par la fluorescence (fluorescence activated cell sorter, FACS) de faible débit, ou encore un lavage de cellules qui peut gravement nuire à l’intégrité des fragiles adipocytes utilisés dans ces tests.
Le test QBT Fatty Acid Uptake utilise un analogue d’acide gras fluorescent, l’acide dodécanoïque, BODIPY®, associé à notre technologie de désactivation exclusive. L'étiquette BODIPY fournit un analogue idéal d’acide gras à longue chaîne qui se comporte comme des acides gras d'origine naturelle. C'est un substrat connu pour les transporteurs d’acide gras.
- Le format de ce test homogène et en une étape permet un criblage à haut débit.
- Le test par fluorescence avec technologie de désactivation exclusive permet aux utilisateurs de surveiller en temps réel les cinétiques d’assimilation dans les cellules vivantes.
- Il remplace les protocoles longs et fastidieux de test par fluorescence et radioactivité.
- La suppression des composés radioactifs réduit les coûts d’élimination et les risques liés aux tests radioactifs.
Données sur le kit d’essai QBT pour la réabsorption des acides gras
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Fibroblastes par rapport aux adipocytes
Des adipocytes 3T3-L1 ont été étalés à raison de 50 000 cellules/puits dans 100 µl de DMEM/FBS dans une plaque à 96 puits et incubés à 37 °C pendant 5 heures. Le milieu de croissance a ensuite été remplacé par une solution d’assimilation d’acide gras. Les lectures cinétiques ont été lancées immédiatement avec un lecteur FlexStation® 3 de Molecular Devices. A : adipocytes ; B : fibroblastes ; C : aucune cellule (réactif d’assimilation uniquement).
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Fibroblastes comparés aux adipocytes ; dose-réponse de l’insuline
Des adipocytes 3T3-L1 ont été étalés à raison de 50 000 cellules/puits dans 100 µl de DMEM/FBS dans une plaque à 96 puits et incubés à 37 °C pendant 5 heures, puis ont été privés de sérum pendant 1 heure. Différentes concentrations d’insuline ont été ajoutées dans le puits et incubées pendant 30 minutes à 37 °C, incubateur à 5 % de CO2. À la fin du temps d’incubation, 100 µl de mélange d’acides gras ont été ajoutés dans le puits, puis les lectures cinétiques ont été lancées immédiatement avec un lecteur FlexStation® 3. Les traces A à F correspondent à des adipocytes avec 160, 16, 8, 1,6, 0,16, et 0 nM d’insuline, respectivement ; les traces G et H correspondent à des fibroblastes avec 0 et 160 nM d’insuline, respectivement.
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Effets inhibiteurs de la leptine
Des adipocytes 3T3-L1 ont été étalés à raison de 50 000 cellules/puits/100 µl de DMEM/FBS dans une plaque à 96 puits pendant 5 heures, puis ont été privés de sérum pendant 1 heure avec ou sans leptine (100 nM). De l’insuline à 10 nM a ensuite été ajoutée dans le puits et incubée pendant 30 minutes supplémentaires à 37 °C, incubateur à 5% CO2. À la fin du temps d’incubation, 100 µl d’acide gras ont été ajoutés dans le puits, puis les lectures cinétiques ont été lancées immédiatement avec un lecteur FlexStation®3. Données aimablement fournies par Cambridge Biotechnology. A : insuline, B : insuline et leptine, C : basal.
Technologie du kit d’essai QBT Fatty Acid Uptake
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Principe du test
Le kit QBT de test de captage des acides gras inclut un tampon de dissociation contenant un analogue d’acide gras fluorescent, ainsi qu’un colorant de désactivation pour atténuer fortement la fluorescence dans l’espace extracellulaire. Lorsque le tampon de dissociation est ajouté aux cellules, le transport de l’analogue d’acide gras fluorescent dans les cellules entraîne une augmentation du signal de fluorescence qui peut être mesurée en temps réel à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence à lecture par le bas. L'inhibition du transport des acides gras par les composés de l'essai entraîne une réduction de l'intensité de fluorescence par rapport aux puits témoins.
Principe du test
Le kit QBT de test de captage des acides gras inclut un tampon de dissociation contenant un analogue d’acide gras fluorescent, ainsi qu’un colorant de désactivation pour atténuer fortement la fluorescence dans l’espace extracellulaire. Lorsque le tampon de dissociation est ajouté aux cellules, le transport de l’analogue d’acide gras fluorescent dans les cellules entraîne une augmentation du signal de fluorescence qui peut être mesurée en temps réel à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence à lecture par le bas. L'inhibition du transport des acides gras par les composés de l'essai entraîne une réduction de l'intensité de fluorescence par rapport aux puits témoins.
Ressources sur le kit d’essai QBT Fatty Acid Uptake
Livre électronique
Tests optimisés pour la recherche de pointe
Optimized Assays for Breakthrough Research
La recherche en biologie a été largement simplifiée par les kits de test, instruments et protocoles d’analyse normalisés commercialisés par les fabricants.
Affiche scientifique
Quantification de la recapture des acides gras dans les cellules HepG2 et les adipocytes à l’aide du test QBT™ Fatty Acid Uptake
Quantification of Fatty Acid Uptake in HepG2 Cells and Adipocytes Using the QBT™ Fatty Acid Uptake Assay
Dans cette affiche, nous démontrons que le test QBT Fatty Acid Uptake est adapté à l’analyse de la recapture des LCFA dans d’autres types de cellules de mammifère, ainsi que dans les adipocytes précédemment montrés. Fa…
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Affiche scientifique
La pertinence des cellules primaires apportée au criblage : cellules immortalisées de façon conditionnelle Clonetics et test d’assimilation d’acide gras QBT™ pour le criblage à haut débit
Bringing Primary Cell Relevance to Screening: Clonetics Conditionally Immortalized Cells and QBT™ Fatty Acid Uptake Assay for High Throughput Screening
Ce document décrit comment le kit d’essai QBT Fatty Acid Uptake fournit un test in vitro homogène en une seule étape pour la recherche sur les maladies métaboliques et la HTS. Télécharger pour en savoir plus…
Fiche technique
Kit QBT de test de captage des acides gras
QBT Fatty Acid Uptake Assay Kit
Le kit d’essai QBT Fatty Acid Uptake permet une cinétique de recapture en temps réel et est parfaitement adapté aux applications de criblage à haut débit. Lire cette fiche technique pour découvrir le kit QBT Fatty Acid.
