Analyse de l'apoptose au moyen de l'imagerie cellulaire automatisée
L'apoptose est un processus de mort cellulaire programmée important pour un grand nombre de processus biologiques, notamment le développement embryonnaire et l'entretien tissulaire normal. Une perturbation de la régulation de l'apoptose est impliquée dans diverses pathologies, notamment le cancer. Des événements biochimiques conduisent à des modifications caractéristiques de la morphologie cellulaire, telles que rétrécissement des cellules, fragmentation nucléaire, condensation de la chromatine, fragmentation de l'ADN chromosomique et dégradation de l'ARNm. L'apoptose peut être initiée via la voie intrinsèque ou extrinsèque, et les deux voies induisent la mort cellulaire en activant les enzymes caspases.
Une façon d’analyser l’apoptose est de détecter la caspase-3 et la caspase-7, qui sont toutes deux activées au cours de la phase d’exécution de l’apoptose. Par exemple, le kit de test EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 offre un substrat pouvant détecter l'activité des caspases 3 et 7 dans les cellules intactes. Le substrat est composé d'un colorant d’ADN fluorogène conjugué à la séquence de reconnaissance DEVD des caspases 3 et 7. Sous sa forme initiale non fluorescente, le substrat peut traverser la membrane plasmique et pénétrer dans le cytoplasme. Dans les cellules apoptotiques, le substrat est clivé par les caspases 3 et 7, libérant ainsi un colorant à haute affinité pour l'ADN qui migre vers le noyau de la cellule et se fixe à l'ADN. L'excitation à 500 nm entraîne l'émission d'une fluorescence vert clair à 530 nm et peut être utilisée pour évaluer le niveau d'activation des caspases. Les cellules apoptotiques peuvent alors être visualisées et quantifiées au moyen de l'imagerie automatisée.
Des cellules HeLa ont été traitées avec le composé staurosporine et colorées avec le kit de test EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488(vert). Le masque de superposition (à droite) montre les cellules apoptotiques identifiées en vert et les cellules non apoptotiques en rouge.
Les images des cellules apoptotiques peuvent être analysées sur le système d’imagerie cellulaire automatisé ImageXpress Pico, qui offre un modèle de protocole « Apoptose » préconfiguré conçu pour l’analyse et l’acquisition faciles des images. Des sorties utiles, telles que le nombre et le pourcentage des cellules apoptotiques et des cellules vivantes, peuvent être automatiquement calculées. Ci-dessous se trouve le flux de travail habituel pour l’imagerie et l’analyse des microplaques lors de tests sur l’apoptose.
Flux de travail habituel de l'imagerie et de l'analyse des cellules apoptotiques.
En résumé, les avantages de l’utilisation du système ImageXpress Pico pour les tests apoptotiques incluent :
- Possibilité de visualisation et de suivi directs de la mort cellulaire
- Possibilité d'évaluation objective des cellules, permettant ainsi des résultats reproductibles
- Détermination automatique de résultats précieux comme le nombre et le pourcentage des cellules apoptotiques
Pour en savoir plus, téléchargez notre note d'application « Analyse de l'apoptose au moyen de l'imagerie cellulaire automatisée » >>