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Les tests de détection des contaminants peuvent être utilisés dans diverses applications pour mesurer la contamination d’échantillons variés, allant des surnageants de fermentation et des procédés de purification aux préparations biochimiques telles que les sérums et autres liquides corporels. Ces tests mesurent également la présence de l’ADN des cellules hôtes ainsi que tout autre ADN éventuellement introduit pendant le processus de fabrication biopharmaceutique.

Molecular Devices propose deux kits de test de détection des contaminants sous sa marque Threshold : le test Immuno-ligand (ILA) Threshold® et le test de l’ADN total Threshold®

Le test Immuno-ligand Threshold permet de mesurer un large éventail d’analytes tels que les protéines, les peptides, l’ADN à séquence spécifique et les micro-organismes lors des étapes de développement et de production biopharmaceutiques. Les échantillons peuvent inclure des surnageants de fermentation, des échantillons issus de procédés de purification et autres préparations biochimiques, mais aussi des sérums et autres liquides corporels. Les tests peuvent être développés sous format sandwich ou compétitif en fonction de la taille et des caractéristiques de l'analyte à mesurer.

Le test de l’ADN total Threshold détecte la présence d’ADN simple brin et la quantifie avec une sensibilité de l'ordre du picogramme. Contrairement aux techniques d’hybridation qui nécessitent des sondes ou des amorces d’ADN avec une séquence d’acide nucléique spécifique, le test de l’ADN total Threshold détecte l’ADN avec une spécificité étendue par rapport à la séquence. Le système Threshold peut ainsi détecter l’ADN provenant des cellules hôtes ainsi que tout autre ADN éventuellement introduit pendant le processus de fabrication biopharmaceutique. En outre, comme le test ne nécessite pas d’amorces ou de sondes à séquence spécifique, il peut facilement être utilisé avec différents échantillons purifiés à partir d’organismes hôtes différents.

Test Immuno-ligand (ILA) Threshold®
Test de l’ADN total Threshold®
Anticorps marqué
Test ILA Threshold Anticorps marqués
Anticorps marqué
Test d’ADN Threshold Anticorps marqués
Stade de réaction
Test ILA Threshold Stade de réaction
Stade de réaction
Test d’ADN Threshold Stade de réaction
Stade de séparation
Test ILA Threshold Stade de séparation
 Stade de séparation
Test d’ADN Threshold Stade de séparation
Stade de détection
Test ILA Threshold Stade de détection
Stade de détection
Test d’ADN Threshold Stade de détection
Lors de l'étape de réaction, les anticorps marqués, l’échantillon contenant l’analyte, la streptavidine et le conjugué d’anti-fluorescéine/uréase fournis dans le kit de détection ILA sont incubés pour former un complexe réactionnel. Comme la liaison se produit dans la solution, toutes les molécules sont maintenues dans leur conformation native pour garantir une mesure précise de l’analyte et 100% d’activité des anticorps. De la même manière, un complexe réactionnel se forme dans le test de l’ADN total lorsque la protéine biotinylée qui se fixe à l'ADN simple brin, et les anticorps anti-ADNsb conjugués à l’uréase se lient sans spécificité de séquence à l’ADN simple brin. Tous les composés de kit sont inclus dans le kit de test de l'ADN total.

Pendant l'étape de séparation, la grande affinité de la streptavidine pour la biotine est utilisée pour capturer et concentrer les complexes réactionnels sur une membrane biotinylée par une étape de filtration. Le poste de travail Threshold contient quatre unités de filtrations à 8 canaux avec une possibilité d’ajouter deux collecteurs auxiliaires pour une filtration simultanée totale de 96 échantillons.

Pendant le stade de détection, le complexe de réaction capturé sur la membrane est placé sur le lecteur Threshold contenant l’urée du substrat et le capteur LAPS. Dans le lecteur, l’urée est hydrolysée par uréase, ce qui produit un changement de pH dans un microvolume inférieur à 1 μl. L’activité de l’uréase de huit échantillons différents est détectée simultanément par le capteur pendant une mesure cinétique de 90 secondes. L’incroyable sensibilité, la précision et la reproductibilité du système Threshold® sont obtenues grâce à l’association de petits volumes d’échantillons avec le capteur à faible bruit.

Le test Immuno-ligand (ILA) Threshold® et le test de l’ADN total Threshold® sont compatibles avec le système suivant :


Pour plus d'informations, consultez le tableau de compatibilité des kits de test et instruments.

Test Immuno-ligand (ILA) Threshold®

Nom du produit Description Numéro de référence
Test Immunoligand
Kit de détection
[192 déterminations]
1 réactif standard universel
6 réactifs enzymatiques
1 réactif de capture
6 bâtonnets témoins Threshold
24 bâtonnets Threshold
1 substrat
1 concentré de tampon de test
1 concentré de tampon de lavage
R9003
Test Immunoligand
Kit de marquage
2 flacons marqués biotine (5 mg/flacon)
2 flacons marqués fluorescéine (5 mg/flacon)
R9002


Test de l’ADN total Threshold®

Nom du produit Description Numéro de référence
kit de test Total DNA
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Kit en vrac
[64 déterminations]
10 Bâtonnets Threshold
6 étalonneurs de zéro
2 contrôles positifs
2 étalonneurs élevés
8 réactifs de marquage d'ADN
1 tampon de reconstitution
1 concentré de substrat
2 solutions de rinçage
1 kit de filtres (8 unités)
 
[800 déterminations]
104 Bâtonnets Threshold
20 Bâtonnets témoins Threshold
66 étalonneurs de zéro
20 contrôles positifs
20 étalonneurs élevés
100 réactifs de marquage d'ADN
13 tampons de reconstitution
10 concentrés de substrat
19 solutions de rinçage
13 kits de filtres (104 unités)
R9009
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
R9004