Panier

Système ClonePix 2

Réalisez le criblage haut débit et la sélection objective de cellules mammifères

Criblez automatiquement davantage de clones en moins de temps qu'avec les techniques classiques, sélectionnez les cellules avec de meilleurs niveaux d'expression et choisissez les colonies avec précision grâce au système ClonePix™2. Les systèmes ClonePix™ sont maintenant utilisés dans plus de 100 laboratoires dans le monde pour augmenter la productivité des protocoles, ce qui laisse davantage de temps pour mieux caractériser les protéines cibles et réaliser de nouveaux projets.Un grand nombre d'entreprises biopharmaceutiques ont mis en place des systèmes ClonePix dans leur utilisation courante et les données sont de plus en plus citées dans les publications et les conférences scientifiques .

  • Sélectionnez les cellules dont les niveaux d'expression sont optimum avec un classement reproductible Augmentez la probabilité de trouver des producteurs optimaux et sélectionnez les cellules 
  • Réduisez le temps de développement des lignées cellulaires ou des anticorps ; évitez la dilution limite
  • Rejetez les clones les moins producteurs à un stade précoce à partir de leurs niveaux d'expression in situ
  • Repiquez les colonies avec précision et confiance. Réduisez le risque de perturbation des colonies grâce au nouveau design du robot.
  • Améliorez l'efficacité du protocole en diminuant les étapes de manipulation des plaques

Développement d'anticorps pour la biothérapeutique

Sélection des lignées cellulaires sécrétant de manière optimale

Sélectionnez des clones sécrétant des anticorps monoclonaux optimaux

  • 5463 colonies criblées (5 plaques) en utilisant l'imagerie en lumière blanche et fluorescente
  • 16 sécréteurs élevés sélectionnés
  • Cellules CHO-S mises en culture dans CloneMedia-CHO
  • Criblé pour la sécrétion d'IgG par adjonction d'agent CloneDetect
  • Clones classés selon la fluorescence
    • Paramètres de sélection définis par l'utilisateur
  • Le système sélectionne précisément des clones pour la croissance
    • Les paramètres de proximité évitent la sélection de clones voisins
    • Le système transfère chaque colonie dans un puits d'une microplaque 96 puits 
IgG humain exprimant CHO-S - Système de repiquage de colonies de cellules mammifères ClonePix 2
IgG humain exprimant CHO-S : Image assemblée
d’une plaque PetriWell-1 sélectionnée le jour 13
Lignées cellulaires sécrétrices - Système de criblage de clones ClonePix 2
Traçage de classement - Clones classés par
intensité de fluorescence (sécrétion)

Principe d'imagerie - Détection sans marquage (label-free) d'anticorps sécrétés

Détection sans marquage (label-free) d'anticorps sécrétés - Système de repiquage de colonies de cellules mammifères ClonePix 2

  • Clones sécrétants mis en culture en milieu semi-solide
  • Agent CloneDetect ajouté
  • Les anticorps sécrétés forment un précipité fluorescent

Développement de lignées cellulaires pour applications biothérapeutiques

Sélectionnez le producteur optimal des lignées cellulaires NS/0 et CHO avec le système ClonePix

  • Analyse plus de clones que les méthodes classiques, en augmentant la probabilité de trouver des sécréteurs élevés et rares
  • Isole automatiquement des colonies clonales, en supprimant le besoin de dilutions limite
  • L'indication in situ de lignées cellulaires supérieures supprime les clones indésirables des traitements ultérieurs

AVEC L'AIMABLE AUTORISATION DU DR JIANGUO YANG, GROUPE LEADER DANS LE DÉVELOPPEMENT DE LIGNÉES CELLULAIRES, MEDIMMUNE LLC

Comparaison de techniques :
 

Lignées cellulaires NS/0 et CHO - Système de criblage de clones ClonePix

Système ClonePix

  • De la lignée cellulaire parentale au flacon d’agitation : 1 mois
  • 10000 clones analysés

Dilution limite

  • De la lignée cellulaire parentale au flacon d’agitation : 2 mois
  • 1000 clones analysés
Comparaison des méthodes de clonage :
 

Comparaison des méthodes de clonage - Système de repiquage de colonies de cellules mammifères ClonePix 2

Système ClonePix

  • 2500 clones par semaine
  • Clonage sur 1 semaine

Dilution limite

  • 300 clones par semaine
  • Clonage sur 3 semaines

Comparaison des meilleurs clones à partir du système ClonePix et de la dilution limitante

Clone Titre (g/L) qP (pcd)  
Clone 1 4,5 54,6 Système ClonePix
Clone 2 4,4 44,6
Clone 3 4,3 49,4
Clone 4 4,0 43,8
Clone A 2,9 32,7 Dilution limitante
Clone B 2,8 21,0
Clone C 2,7 20,9
Clone D 2,6 29,0
  • Les lignées cellulaires sélectionnées étaient environ 2 fois plus productives que celles sélectionnées par la méthode classique
  • Sous-clones à partir du même parent (cellules NS/0)

Titres élevés de clones finaux à partir de la méthode du système ClonePix

Clone Titre (g/L)
1 5,8
2 5,3
3 5,7
4 5,8
  • Cellules CHO - processus de lot sur 14 jours dans des flacons d'agitation
  • Clones supérieurs obtenus (NS/0 : 4 à 5 g/L, CHO : 5 à 6 g/L) avant même de passer à l'optimisation
Conclusion de MedImmune : « Le système ClonePix est un outil puissant pour le développement de lignées cellulaires. Cette méthode permet d'avoir une sélection plus rapide et moins fastidieuse des meilleurs producteurs et de raccourcir le temps de développement des lignées cellulaires. »

Informations supplémentaires :

Sélection rapide et efficace de cellules de mammifères à productivité élevée sécrétant des protéines thérapeutiques/peptides : téléchargement de la note d’application

Élimination des clones instables

  • Révélez l'instabilité clonale avec les systèmes ClonePix
  • Etalez à nouveau des aliquotes de clones sélectionnés en milieu semi-solide et, sous 4 à 7 jours, procédez à nouveau à l'imagerie pour vérifier et comparer les taux de production des clones fils et/ou analyser de nouveau des sous-clones dans les 7 à 14 jours. 

L'exemple montre les résultats à partir d'une sélection de clones stables par le deuxième criblage. Le système transfère chaque colonie dans un puits d'une microplaque 96 puits.

Sélection des clones stables - Système de criblage de clones ClonePix 2
Les meilleurs 2 % de la population transfectée
de cellules CHO adaptées à la suspension,
collectés et testés pour la productivité
Élimination des clones instables - Système de repiquage de colonies de cellules mammifères ClonePix 2
Productivité vs fluorescence après un second
criblage. Notez l’élimination des clones
à fluorescence élevée et à faible productivité
(instables).

La confluence cellulaire et le nombre de cellules peuvent être suivis par le CloneSelect Imager

Détection d'anticorps pour la recherche

Identification des meilleures lignées
cellulaires d’hybridomes pour le développement d’anticorps

  • La lignée cellulaire d'hybridome parental a été étendue et criblée sur le système ClonePix
  • Clones à rendement élevé sélectionnés par le système ClonePix et dont la culture est surveillée sur le système d'imagerie CloneSelect
  • Clones présentant la meilleure croissance analysés pour la spécificité de l'antigène par un test de liaison de peptide cible
  • Les sous-clones spécifiques de valeur ont été isolés par la production pilote et la banque de cellules
  • Flux de travail réduisant le temps de criblage d'hybridomes de > 50 % en trouvant les meilleurs producteurs sécrétant les IgG à des titres élevés
Titre des lignées cellulaires d'hybridomes - Système de criblage de clones ClonePix 2
Image en lumière blanche
Détection d'anticorps - Système de repiquage de clones de mammifères ClonePix 2
Image fluorescente

Le criblage haut débit de centaines de colonies de sous-clones à partir d'hybridome parental sur le système ClonePix aide à la sauvegarde et à la stabilisation d'une lignée cellulaire d'hybridome supérieur sécrétant un anticorps monoclonal hautement spécifique vers un antigène viral immunogène.

Pour en savoir plus

Amélioration du développement d'hybridomes spécifiques à un virus en utilisant les technologies d'imagerie ClonePix et CloneSelect : téléchargement de la note d’application


Principe d'imagerie - Détection sans marquage (label-free) d’AcM spécifiques de l’antigène sécrétésAcM spécifiques de l’antigène sécrétés

  • Clones d'hybridomes développés en milieu semi-solide
  • Le Facteur d'initiation complexe (CIF) piège l’AcM sécrété
  • L'antigène conjugué de façon fluorescente cible les clones sécrétant l'IgG

Pour en savoir plus

Criblage et sélection d'hybridomes ou de cellules B antigène-spécifiques

Criblage des hybridomes spécifiques de l’antigène

  • Criblez et sélectionnez des clones spécifiques de l’antigène in situ
  • Adapté à une large gamme d'antigènes
    • - Protéine multimérique 160 kD à phosphopeptide 2,6 kD
Hybridomes spécifiques de l’antigène
Image en lumière blanche
IgG spécifique à l’antigène 60kD conjugué au FITC - Système ClonePix 2
Clone produisant de l’IgG spécifique à
l’antigène 60kD conjugué au FITC
Criblage des hybridomes spécifiques de l’antigène
Image en lumière blanche
FITC conjugué 60 kD à protéine de contrôle
FITC conjugué 60 kD à protéine de contrôle

Principe d'imagerie - Détection sans marquage (label-free) d’AcM spécifiques de l’antigène sécrétésimage_antigen_0.gif

  • Clones d'hybridomes développés en milieu semi-solide
  • Le Facteur d'initiation complexe (CIF) piège l’AcM sécrété
  • L'antigène conjugué de façon fluorescente cible les clones sécrétant l'IgG

Pour en savoir plus

Expression et production de protéines

Sélection et développement des lignées cellulaires exprimant des GPCR

Détection et sélection de cellules exprimant des RCPG à de faibles niveaux endogènes

  • Cellules positives (CHO-M1) et négatives (CHO-K1) étalées dans CloneMedia et incubées pendant 8 à 10 jours
  • Anticorps avec marquage ajoutés et cellules évaluées par imagerie en lumière blanche et fluorescente
  • Cellules visibles dans les deux canaux sélectionnées et mises en culture
  • Expression RCPG validée par les signaux de calcium fluorescents sur le système FLIPR Tetra
Lignées cellulaires exprimant des GPCR
Le système localise et identifie
les clones en utilisant la lumière blanche.
Expression de GPCR
Des cellules positives pour l’expression RCPG
sont visibles dans le canal fluorescent.

Pour en savoir plus

Sélection par expression intrinsèque du rapporteur

Exemple : détection de rapporteur GFP intrinsèque 

  • Cellules cancéreuses de sein humain (MCF-7) transfectées avec une protéine de fusion marquée à la GFP, exprimée en interne
  • Cellules développées comme des colonies adhérentes en milieu liquide de Earle MEM + 10 % FBS
  • Jour 8 : clones exprimant les GFP les plus élevées repiquées de façon sélective
Expression intrinsèque du rapporteur - Lumière blanche
Lumière blanche
Rapporteur GFP intrinsèque
GFP
Expression intrinsèque du rapporteur - Après la sélection
Après sélection

Sélection par marqueur d’expression de surface cellulaire

  • CHO K-1 adhérentes transfectées de façon stable avec récepteur P2Y1 Marqueur d’expression de surface cellulaire
  • Cellules développées en milieu semi-solide CloneMatrix
  • Jour 8 : récepteur anti-P2Y1 polyclonal conjugué avec FMAT-Blue ajouté par pulvérisation
  • Jour 9 : clones à forte expression de récepteur P2Y1 analysés et sélectionnés

Informations supplémentaires :

Sélection automatisée rapide de colonies de cellules de mammifères par expression de protéines de surface : téléchargement de la note d’application

Sélection de clones sécrétant une protéine recombinante marquée

Détection de protéines monomériques secrétées taguées His/FLAG

  • Cellules CHO adhérentes transfectées de façon stable
  • Se développant sous forme de colonies en suspension dans le milieu semi-solide CloneMatrix avec polyclonaux anti-His et anti-FLAG conjugués FITC
  • Meilleurs sécréteurs analysés et sélectionnés à J8
Protéine recombinante taguée
Image en lumière blanche
FITC - Protéine recombinante taguée
Image FITC

Principe d'imagerie

Principe d'imagerie - Protéine recombinante taguée

Criblage de cellules souches/Entretien de lignées de cellules souches

Maintien des lignes utilisant la morphologie des colonies (lumière blanche)

Entretien de cellules souches humaines (BG01V hES) en utilisant la lumière blanche et la morphologie

  • Cellules souches humaines (BG01V hES) développées en colonies sur une couche de cellules nourricières en milieu liquide
  • Plaques évaluées par imagerie et colonies sélectionnées selon la morphologie
Morphologie des colonies en lumière blanche
Cellules souches identifiées par
image en lumière blanche
sur le ClonePix
Cloneselect Imager
Clone repiqué et déposé
dans une plaque 96-puits. Imagé
sur le Clone Select Imager

Formation de colonie

Les cellules se développent sur des plaques source contenant du CloneMedia semi-solide. Cette méthode facilite l'étalement d'un grand nombre de cellules et garantit la formation de colonies discrètes pour une meilleure obtention de clones indépendants.

Colonies de types de cellules communément utilisés, se développant dans CloneMedia. Images capturées par le CloneSelect Imager

Formation de colonies CHO
Coloniesde CHO adaptées
suspension sans sérum
dans du CloneMedia CHO,
imagées à J8 après étalement.
Formation de colonies d'hybridomes
Colonies d'hybridomes dans
CloneMedia Hybridoma/
Myeloma imagées à
J8 après étalement.
Formation de colonies HEK293
Colonies HEK293, sans sérum,
adaptées suspension, dans
CloneMedia HEK imagées
à J13 après étalement.
 
Formation de colonies CHOK1SV
Colonies CHOK1SV, adaptées
suspension sans sérum
dans CloneMedia-CHOK1SV
imagées à J 9 après étalement.
 

Choix des méthodes de détection

Détection en utilisant la lumière blanche pour l'imagerie et la sélection, et la fluorescence pour indiquer les niveaux d'expression

Détection des protéines recombinantes et des marqueurs d'expression

Protéines recombinantes et marqueurs d'expression
La protéine secrétée contient des épitopes tag
par exemple His, FLAG ou Fc

Détection sans marquage (label-free) d'anticorps monoclonaux  antigène- spécifique à partir d'hybridomes 

Hybridomes AcM spécifiques de l’antigène
L'antigène conjugué ou tagué et fluorescent est utilisé avec le CIF
(Complex Initiation Factor) pour générer un précipité.

Détection sans marquage (label-free) d'anticorps sécrétés 

Détection des anticorps sécrétés
Les agents conjugués fluorescents de CloneDetect permettent la
détection in situ d'IgG secrétées de souris, de rat ou humaines.
Ces agents peuvent être utilisés sous forme
liquide ou pulvérisés sur les colonies. Les niveaux relatifs
de secrétion sont alors mesurés sur des milliers de clones en parallèle. 1000

Imagerie et analyse

Les colonies sont évaluées avec l'imagerie par lumière blanche et fluorescence, puis analysées par le système.

Imagerie et analyse des colonies
L'image en lumière blanche permet d'identifier
et de mesurer la morphologie des clones,
leur taille et leur proximité.
Analyse d'imagerie par fluorescence des colonies
L'image en fluorescence identifie
les niveaux d'expression

Classement et affichage des données

Classement et affichage des données - Système ClonePix 2
Classement selon critères
  • Clones classés selon la fluorescence
  • L'utilisateur définit des paramètres de sélection ; le système sélectionne des clones
    • Critères morphométriques tels que la taille, la forme et la proximité des colonies voisines
    • Critères quantitatifs tels que la sécrétion de protéines ou la production de protéines spécifiques
  • Les code-barres des plaques source et destination permettent le suivi des données.
  • Les images de tous les clones prises avant et après repiquage sont stockées avec leurs données, dont les coordonnées de picking

*Download the specifications in our ClonePix 2 brochure here.

*在我们的ClonePix 2手册中下载规格 这里.

Spécifications du ClonePix2
Imagerie 
Logiciel Logiciel dédié d'imagerie pré-installé sur PC, Microsoft Windows 7
Imagerie en lumière blanche • Trans- illumination pour imager les colonies à faible contraste telles que les cellules adhérentes en monocouche ou les petites colonies en suspension
• Epi-illumination pour imager les colonies lorsqu'elles sont prélevées
Suivi des données le Lecteur de code-barres interne pour plaques source et destination permet le suivi des données à chaque run
Caméra Caméra CCD 16 bits intégrée refroidie
Vitesse d'imagerie Microplaque 6-puits: 5 minutes pour 2 longueurs d'onde (conditions standard)
Résolution Standard : 28 microns ; Maximum : 1,5 microns
Instruments
Confinement Environnement de travail clos avec filtration HEPA type Class-100
Type de plaques source PetriWell 6-puits, PetriWell 1-puits, plaque Greiner 6-puits, plaque Nunc 6-puits, OmniTray Nunc
Type de plaques de destination Plaque PetriWell 96-puits, plaque Costar 96-puits, Plaque Nunc 96-puits, plaque Falcon96-puits
Capacité en plaques source 10 plaques
Capacité en plaques de destination 10 plaques
Tête de picking 8 aiguilles de picking - chacune controllée de façon indépendante
Taille des aiguilles de picking Le diamètre des aiguilles de picking dépend de l'application - F1: cellules en suspension ; F2: cellules adhérentes
Vitesse de picking >200 clones par heure
Nettoyage Bain d'éthanol, remplissage automatique
Fluides pour le système de picking Bouteille de 5 litres d'eau stérile pour l'alimentation, bouteille de 5 litres pour rejet
Séchage des aiguilles Station brevetée de séchage des aiguilles par halogène
Dimensions de l'instrument 1 010 mm (largeur) x 900 mm (profondeur) x 1 490 mm (hauteur)
Poids de l'instrument 350 kg
Caractéristiques relatives à l'air comprimé
Air Propre, exempt d'huile avec filtration submicronique
Pression de fonctionnement minimale 6 bars (~90 psi)
Volume de fonctionnement minimal 80 l/min
Caractéristiques relatives au compresseur optionnel
Compresseur Propre, exempt d'huile avec filtration submicronique
Dimensions 250 mm (largeur) x 600 mm (profondeur) x 750 mm (hauteur)
Poids 60 kg
Pression de fonctionnement minimale 6 bars
Volume de fonctionnement minimal 80 l/min
Niveau sonore 61 dB(A
Homologation réglementaire
Conformité CE
Qualité Certification ISO9001:2008
Ressources disponibles
Documentations Webinaires
Publications Support produit
Citations associées Pour commander

 

 

 

 

 

 

Documentation

Brochures et catalogue

Applications

Applications complémentaires

Vidéos

eBooks

Posters

Autres affiches

Infographie

Webinaires associés

  • Amélioration de la découverte d'hybridomes pour l'immunodiagnostic en utilisant les technologies d'imagerie ClonePix et CloneSelect
  • Identification et sélection de lignées cellulaires GPCR avec le ClonePix 2System

Publications associées

Plus de publications

 

Support produit

 

Dernières citations :
Pour une liste complète des citations, veuillez cliquer ici.

citations associées

Analyse ClonePix FL haut débit de clones exprimant des AcM avec le système d'expression UCOE

JJC Hou, BS Hughes, M Smede, KM Leung, K Levine… - New biotechnology, 2014 - Elsevier
Therapeutic recombinant monoclonal antibodies (mAbs) are commonly produced by high-expressing, clonal, mammalian cells. La création de ces clones en vue de cette production dépend considérablement d'une sélection rigoureuse et de l'amplification des gènes, ce qui à son tour peut conduire à ...

Rapid isolation of antigen-specific clones from hybridoma fusions

CJ Mann - Nature Methods, 2007 - nature.com
... The Genetix ClonePix FL is a powerful way to find and collect antigen-specific clones from hybridoma fusions in a rapid one-step process—shortening the process timeline and allowing parallel interrogation of multiple antigens in the monoclonal antibody discovery process. ...

Stem and iPS cell selection: quantitation of surface marker (SSEA1) and intracellular GFP

CJ Mann, ENC Newman, DJ Whitney, NJ Latchem… - Nature …, 2007 - test.nature.com
... The Genetix ClonePix FL technology, already established for the rapid one-step identification and isolation of hybridomas and cell lines for biopharmaceutical production, can be used to isolate and collect stem cells expressing specific cell surface and intracellular proteins. ...

Improving Clone Production for Increased Protein Yield from Mammalian Cell Lines

S Williams, R Cranenburgh - Innovations in Pharmaceutical …, 2008 - iptonline.com
... An alternative approach for the screening of secreting clones is the use of cell imaging systems such CellXpress marketed by Sigma-Aldrich Corporation, and ClonePix FL from Genetix Ltd. ClonePix FL can screen around ten thousand in three weeks. ...

Rapid automated selection of mammalian cell colonies by cell surface protein expression

ENC Newman, D Whitney - Nature Methods| Application Notes, 2007 - nature.com
... Top of page Abstract. Genetix's unique ClonePix FL technology uses our ability to grow mammalian cells into clonal colonies suspended in semisolid media, and image these colonies using fluorescence assays and markers. ...

An improved clone selection method

U Jamnikar, M Blas, D Gaser… - Proceedings of the 21st …, 2012 - Springer
... Dans la plupart des cas, il n'existe aucune ressource pour isoler et analyser plus de quelques 100 clones. La technologie ClonePix FL (CP-FL, Genetix) accroît considérablement le nombre de clones criblés dans le pool sélectionné avant l'expansion dans des microplaques. ... 1.2.1 ClonePix FL. ...

Micropallet arrays for the separation of single, adherent cells

G To'a Salazar, Y Wang, G Young, M Bachman… - Analytical …, 2007 - ACS Publications
... the sample during collection. ClonePix (Genetix, Hampshire, UK) is an automated system that uses image recognition to guide a suction pipet that aspirates colonies of loosely adherent cells from plates. The system requires ...

High‐Throughput Technologies in Bioprocess Development

T Carrier, E Heldin, M Ahnfelt, E Brekkan… - Encyclopedia of …, 2010 - Wiley Online Library
... Cell Line Development Technology Developer ClonePix Fl Genetix LEAPTM Cyntellect FACS Multiple developers ... The ClonePix Fl technology, developed by Genetix, capitalizes on a system in which mammalian cells are cultured in a semisolid media and then imaged using 1 ...

Screening and Subcloning of High Producer Transfectomas Using Semisolid Media and Automated Colony Picker

S Dharshanan, CS Hung - Monoclonal Antibodies, 2014 - Springer
... 3.2 Sanitization and Calibration of ClonePix FL System. Diligently follow the instructions of the pre-programmed software in the ClonePix FL system. ... 10. Sanitize the system with ultraviolet light for 10 min. 3.3 Selection of High-Producing Transfectomas Using ClonePix FL System. ...

Screening and Selection of GPCR-Expressing Cell Lines

A Glaser - 2014 - online.liebertpub.com
... The ClonePix™ 2 System from Molecular Devices represents a proven, one-step method of screening large cell populations rapidly. ... The ClonePix 2 System is a platform enabling the identification and isolation of GPCR clones in an accurate and rapid manner. ...