Western Blot
Qu’est-ce que le Western blot ?
Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Cette technique permet la séparation et l’identification d’une protéine d’intérêt spécifique dans un mélange complexe de protéines, par exemple, un lysat cellulaire. Avec des applications dans les domaines du diagnostic, de la biotechnologie, de la biologie moléculaire, de la protéomique, et bien plus encore, la technique Western Blot est largement utilisée pour évaluer le niveau d’expression des protéines dans les cellules, ainsi que les variations de taille et d’autres propriétés.
Méthodes Western Blot
Il existe plusieurs méthodes Western Blot selon l’anticorps secondaire utilisé. La détection de la protéine cible peut se faire par colorimétrie, chimioluminescence ou fluorescence. Ces méthodes sont décrites ci-dessous et requièrent différents équipements pour la détection. Par exemple, la chimiluminescence peut être détectée à l’aide d’un film radiographique ou d’un équipement d’imagerie numérique, tandis qu’un anticorps secondaire fluorescent requiert un imageur de fluorescence. Chaque type de détection présente des avantages et des inconvénients qui doivent être pris en compte lors de la sélection d’une méthode.
Une autre méthode que nous avons introduite, le système de détection par Western Blot ScanLater™, permet une détection par Western Blot unique en son genre sur une plateforme de lecteurs de microplaques multimode. En utilisant ce test sans substrat, vous pouvez obtenir une sensibilité équivalente aux tests de chimioluminescence conventionnels, tout en optimisant vos tests Western Blot et ELISA et d’autres applications en utilisant un seul et même lecteur. Nos notes d’application caractéristiques ci-dessous fournissent davantage de détails.
Flux de travail d’un test Western Blot
Voici les étapes utilisées pour un test Western Blot typique :
1. Réalisation d’une électrophorèse : Les protéines sont tout d’abord triées par taille au moyen d’une électrophorèse sur gel.
2. Transfert : Les protéines sont ensuite transférées vers une membrane de transfert, généralement en nitrocellulose ou PVDF, qui est sondée avec un anticorps primaire spécifique à la protéine d’intérêt.
3. Blocage avec un tampon de blocage : Cette étape empêche la liaison de l’anticorps primaire (étape suivante) à la membrane.
4. Incubation avec l’anticorps primaire : L’anticorps primaire se lie à la protéine cible.
5. Lavage avec un tampon de lavage : L’anticorps primaire non lié est éliminé par lavage.
6. Incubation avec un anticorps secondaire : Un anticorps secondaire qui reconnaît et se lie à l’anticorps primaire est ajouté. Cet anticorps secondaire est conjugué à une enzyme ou à une autre substance permettant la détection de la protéine d’intérêt, qui apparaît sous forme de bande sur le support.
7. Lavage avec un tampon de lavage : L’anticorps secondaire non lié est éliminé par lavage.
8. Détection avec la méthode/chimie choisie : La protéine cible peut être détectée par colorimétrie, fluorescence ou luminescence, selon l’anticorps secondaire utilisé.
Vue d’ensemble du test Western Blot
Méthodes Western Blot
Applications du Western Blot
- Détection et quantification des protéines avec le système de détection ScanLater Western blot
- Validez les cellules éditées par CRISPR à l’aide de l’imagerie et de la détection par Western Blot
- Puits pour Western blot : Recherches sur la réponse au choc thermique cellulaire
- Estimation du poids moléculaire des protéines avec l’échelle protéique ScanLater Western Blot
- Détection de protéine basée sur des protéines marquées à l’Europium