Western Blot

Western Blot par colorimétrie

Une méthode Western Blot par colorimétrie utilise un anticorps secondaire conjugué à une enzyme et un substrat chromogénique pour la détection.

Atouts :

• Ne requiert aucun équipement spécial

Inconvénients :

• Sensibilité limitée (plage pg)
• Les transferts ne peuvent pas être nettoyés et réutilisés pour étudier des cibles supplémentaires

Western Blot par chimioluminescence

Un Western Blot par chimioluminescence utilise un anticorps secondaire conjugué à une enzyme et un substrat luminescent. Les résultats sont détectés à l’aide d’un film radiographique et d’un équipement en chambre noire, ou d’un système d’imagerie numérique.

Atouts :

• Sensibilité (taux fg)
• Les transferts peuvent être nettoyés et réutilisés

Inconvénients :

• Les résultats peuvent être non linéaires
• Le signal a une courte durée de vie
• Les équipements requis pour la détection peuvent être onéreux et volumineux

Western Blot par fluorescence

Un Western Blot par fluorescence utilise un anticorps secondaire conjugué à un fluorophore, ainsi aucun substrat n’est requis. Un imageur par fluorescence est requis pour détecter les résultats.

Atouts :

• Gamme dynamique supérieure et meilleure linéarité par rapport aux méthodes par colorimétrie ou luminescence
• Multiplex possible en utilisant des fluorophores différents

Inconvénients :

• Peut être moins sensible que la chimioluminescence
• Requiert un système d’imagerie par fluorescence spécial

Système de détection ScanLater Western blot

Avec le système de détection par Western Blot ScanLater^™, l’anticorps secondaire est conjugué à un fluorophore en temps résolu, permettant d’associer les atouts des méthodes par fluorescence et par chimioluminescence.

• Aucun substrat n’est requis pour la détection
• Stabilité du signal pendant des mois, voire plus
• Sensibilité à des niveaux inférieurs au picogramme
• Large gamme dynamique

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Détection et quantification des protéines avec le système de détection ScanLater Western blot

La détection des protéines est actuellement importante en recherche pharmaceutique et clinique, et les Western Blots font partie des méthodes les plus fréquemment employées. Diverses techniques sont utilisées pour détecter les protéines sur les membranes Western Blot, notamment la fluorescence et la chimiluminescence. Toutefois, chaque technique a ses propres limitations, et il est indispensable d’améliorer la quantification, la précision et la gamme dynamique.

Cette note d’application démontre une gamme dynamique étendue en raison de la diminution du bruit de fond, ainsi qu’une stabilité de détection dans le temps et du nombre de lectures. En outre, une comparaison du système Scanlater Western Blot à une méthode par chimioluminescence montre une sensibilité améliorée.

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Validez les cellules éditées par CRISPR à l’aide de l’imagerie et de la détection par Western Blot

L’édition du génome a été largement utilisée pour étudier l’expression génique et la fonction des protéines, mais ces méthodes sont généralement laborieuses et inexactes1. Le système CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats [Courtes répétitions palindromiques groupées et régulièrement espacées])/Cas9 est un outil très populaire pour l’édition des gènes en raison de sa précision élevée et de sa facilité d’utilisation2.

Ici, nous démontrons comment le lecteur de microplaques multimode SpectraMax i3x et le système ScanLater Western Blot Detection peuvent être utilisés pour valider l’édition du génome avec CRISPR/Cas9.

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Puits pour Western blot : Recherches sur la réponse au choc thermique cellulaire

L’étude d’une réponse cellulairepeut impliquer de multiples approches de collecte d'informations : imagerie, tests de prolifération et deviabilité cellulaires, Western Blot afin d'observer des changements dans l’expression des protéines, et bien plus encore. Plusieurs plateformes d’instruments sont souvent requises pour recueillir les résultats nécessaires, entraînant l'apprentissage de plusieurs progiciels durant le processus.

Dans cette note d’application, nous montrons comment des données concernant plusieurs paramètres cellulaires liés ont été recueillies en utilisant un seul instrument, à savoir, la plateforme de détection multimode SpectraMax® i3.

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Estimation du poids moléculaire des protéines avec l’échelle protéique ScanLater Western Blot

L’échelle protéique ScanLater™ Western Blot est un composant essentiel de ce système de détection. Les principales applications de cette échelle protéique comprennent l’estimation du poids moléculaire des protéines, la visualisation de l’électrophorèse sur gel et l’évaluation du procédé de transfert du gel au transfert.

Découvrez comment vous pouvez suivre le flux de travail de l’électrophorèse et du transfert optimisé pour votre application.

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Détection de protéine basée sur des protéines marquées à l’Europium

Détection et quantification de protéines par transfert de Western à partir de protéines marquées à l'europium en utilisant un lecteur de plaques

Ici, nous parlons d’un nouveau système pour l’analyse Western Blot qui est intégré dans un lecteur de microplaques multimode SpectraMax®. Les membranes sont sondées avec des anticorps secondaires marqués à l’Europium ou de la streptavidine marquant la protéine d’intérêt. L’Europium (Eu) a une longue durée de vie de fluorescence, de l’ordre de 1 msec, et la détection s'effectue en mode de détection par fluorescence en temps résolu (FTR), ce qui réduit significativement le bruit de fond issu de l’auto-fluorescence ou d’autres sources d'émissions de courte durée de vie.