Compteur de cellules

Au compteur de cellules : Cellules HUVEC

Les cellules endothéliales de veines ombilicales humaines (HUVEC) sont des cellules primaires isolées au niveau de la veine du cordon ombilical. Elles sont un système modèle pour étudier la fonction cellulaire endothéliale, avec des applications comprenant l’hypoxie, l’inflammation, le stress oxydatif, la réponse à l’infection et l’angiogenèse normale et associée à une tumeur. L’activation des cellules endothéliales, une réponse inflammatoire, peut être induite par les cytokines telles que le TNF-α et l'IFN-γ et entraîne une régulation à la hausse des molécules d’adhésion cellulaire comme VCAM-1/CD106, dont la régulation à la hausse peut être quantifiée en utilisant des anticorps marqués par fluorescence et l' imagerie cellulaire.

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Figure 1 : Numérations cellulaires StainFree

Numérations cellulaires StainFree

Des cellules HUVEC ont été évaluées par imagerie avec le cytomètre d’imagerie SpectraMax i3 MiniMax 300, et les cellules ont été identifiées à partir des images par lumière transmise à l’aide du paramétrage d’analyse prédéfini « CellsB ». À gauche se trouvent les images d'origine par lumière transmise, et à droite se trouvent les mêmes images avec des masques violets indiquant les cellules identifiées par le logiciel. Les cellules ensemencées avec des densités élevées (ligne supérieure) et faibles (ligne inférieure) sont illustrées.

Figure 2 : Numérations cellulaires StainFree vs. numérations nucléaires par fluorescence

Numérations cellulaires StainFree vs. numérations nucléaires par fluorescence

Des cellules HUVEC ensemencées à des densités comprises entre 156 et 20 000 cellules par puits ont été comptées à l’aide de la technologie StainFree (cercles bleus), ou elles ont été colorées avec le colorant rouge vif EarlyTox™ et les noyaux fluorescents rouges ont été comptés (cercles rouges). Les numérations cellulaires obtenues avec les deux méthodes correspondaient étroitement dans toute la plage des densités cellulaires.

Figure 3 : Expression de VCAM-1/CD106 induite par des cytokines dans les cellules HUVEC

Expression de VCAM-1/CD106 induite par des cytokines dans les cellules HUVEC

Des cellules HUVEC traitées avec les cytokines TNF-α et IFN-γ (à gauche) ou non traitées (à droite) ont été colorées avec un anticorps marqué par FITC contre VCAM-1/CD106 et ont été imagées avec le cytomètre d'imagerie SpectraMax MiniMax 300.

Figure 4 : Inhibition de l’expression de VCAM-1/CD106 induite par des cytokines dans des cellules HUVEC

Des cellules HUVEC ont été ensemencées à raison de 10 000 cellules par puits dans une microplaque à 96 puits et ont pu se fixer et se développer pendant la nuit. Elles ont été traitées avec les cytokines TNF-α et IFN-γ, ainsi qu’à différentes concentrations de l’inhibiteur de la MAP kinase p38 SB202190, pendant 24 heures, puis elles ont été colorées avec un anticorps marqué par FITC par rapport à VCAM-1/CD106. Des témoins sans inhibiteur ou cytokines ont été inclus.

Astuce :

Les cellules HUVEC ont un aspect typique de galets. Pour la numération StainFree, le paramètre préconfiguré « CellsB » dans les paramètres d’analyse d’images du logiciel SoftMax Pro Software fonctionne très bien. Sinon, lorsque vous comptez des cellules dont la morphologie a changé en raison du traitement avec des cytokines, etc., il peut être utile de créer un nouveau paramètre d’analyse en dessinant sur les images des cellules.

Kit d’outils d’analyse des cellules HUVEC

Paramètre
Paramétrage pour les numérations cellulaires
Configuration optique
Cytomètre d'imagerie SpectraMax MiniMax 300
Mode lecture
Imagerie
Type de lecture
Point final
Paramétrages de longueur d’onde
Lumière transmise
Paramétrages d’acquisition d'image
Exposition : 8 ms
Paramétrages d’analyse d'image

Type d’analyse : Analyse d'objets discrets

Longueur d’onde pour trouver des objets : TL

Trouver des objets
Paramétrage prédéfini : « CellsB » ou dessin

À propos de la technologie StainFree Cell Detection

Les essais d’imagerie cellulaires nécessitent généralement l'utilisation de sondes fluorescentes pouvant se révéler toxiques pour les cellules vivantes ou ne peuvent être utilisées que dans des cellules fixées. Une méthode sans marquage pour analyser les numérations cellulaires et la confluence des cellules vous permet de surveiller quantitativement la prolifération et la santé des cellules sans flux de travail fastidieux pouvant perturber la viabilité cellulaire.

La plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3 avec le cytomètre d’imagerie MiniMax 300 utilise la technologie unique StainFree Cell Detection en attente de brevet, qui vous permet de réaliser des essais de prolifération cellulaire, de cytotoxicité et d’autres essais sans colorations nucléaires tels que DAPI, qui s’intercale avec l’ADN, et sans colorants de cellules vivantes qui sont toxiques à long terme pour les cellules.