Développement de lignées cellulaires
Les lignées cellulaires stables sont largement utilisées dans de nombreuses applications importantes, notamment la production de molécules biologiques (par ex. protéines recombinantes, anticorps monoclonaux), le criblage de médicaments et les études fonctionnelles de gènes. Le processus de développement de lignées cellulaires stables commence souvent par la transfection de cellules hôtes sélectionnées, en général CHO ou HEK 293, avec les plasmides souhaités. Après la transfection, les chercheurs criblent et quantifient les clones à niveau d'expression élevé. Une fois ces producteurs importants identifiés, les lignées cellulaires et/ou les protéines produites par les cellules sont validées. Les méthodes de criblage manuel traditionnellement utilisées pour le développement de lignées cellulaires sont longues et fastidieuses, augmentant la demande en solutions automatisées à haut débit.
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Techniques de développement de lignées cellulaires
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Tri de cellules uniques
Pour développer des lignées cellulaires, il faut découvrir des clones cellulaires uniques produisant des taux élevés et constants de la protéine thérapeutique cible. La première étape du processus est l’isolation des cellules uniques viables. La dilution limite, une technique s’appuyant sur la probabilité statistique, nécessite un temps considérable. L’imprimante à cellule unique CloneSelect permet d’isoler facilement les cellules de façon à optimiser la viabilité cellulaire, tout en fournissant des preuves directes de clonalité grâce à une série de 5 images capturées durant la distribution des cellules.
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Viabilité cellulaire
Pour développer des lignées cellulaires, il faut découvrir des clones cellulaires uniques produisant des taux élevés et constants de la protéine thérapeutique cible. Une première étape essentielle du processus consiste à isoler des cellules viables uniques. Les cellules uniques prolifèrent de manière à former des colonies, qui peuvent être évaluées pour la productivité de la protéine thérapeutique cible. La viabilité et les taux de croissance des clones cellulaires uniques peuvent être déterminés sur le CloneSelect Imager.
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Assurance de monoclonalité
Le développement de lignées cellulaires et la garantie de monoclonalité constituent des étapes essentielles du processus de création de molécules biopharmaceutiques, telles que les anticorps monoclonaux. Une lignée cellulaire peut être établie après l’isolation d’une cellule viable unique exprimant fortement la protéine d’intérêt. La documentation de preuves de clonalité est l’une des étapes clés de ce processus. Cette preuve de clonalité est généralement documentée à partir d'images, où une image d’une cellule unique est générée et inclue dans les déclarations réglementaires.
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Criblage pour la productivité de clones
Un élément important de l’identification des clones de valeur est la détermination de la productivité de colonies dérivées de cellules uniques. Le criblage pour la productivité au moyen d’approches traditionnelles est un processus laborieux et fastidieux, qui comporte plusieurs étapes, dont l’isolation de cellules uniques à partir d’une dilution limite, suivie d’une évaluation du titre par ELISA. Le système ClonePix 2 combine l’isolation de cellules uniques et le criblage de productivité en une seule étape, ce qui réduit considérablement le temps de criblage et augmente le nombre de candidats.
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Criblage d’expression de surface cellulaire
De nombreuses protéines s’exprimant à la surface des cellules sont des cibles pour la découverte et le développement de produits biopharmaceutiques. Par exemple, les récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) constituent la plus grande classe de protéines de surface cellulaire et sont des cibles pour pratiquement 40 % des médicaments existants. La détection et la sélection de clones de surface cellulaire de valeur à partir d’un pool de cellules transfectées peut s’avérer un processus complexe. Le système ClonePix 2 est une méthode automatisée pour le criblage de vastes populations de cellules, augmentant ainsi la probabilité de découvrir un liant de haute affinité rare ou un producteur élevé.
Ressources sur le développement de lignées cellulaires
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