Développement de lignées cellulaires

1. Transfection est le processus d’introduction d’un ADN étranger (codant pour la protéine recombinante d’intérêt) dans une cellule hôte. La petite population de cellules avec l’ADN étranger intégré dans leur génome qui maintient sa capacité à exprimer la protéine recombinante pendant de longues périodes correspond à des cellules transfectées de façon stable.

2. Criblage des anticorps/classement des titres – Découverte et sélection de clones de haute valeur à partir d’un pool transfecté de cellules. Le criblage de vastes populations en quantifiant l’expression à la surface des cellules de la protéine d’intérêt ou sécrétant des anticorps (classement des titres) augmente la probabilité de découvrir un rare liant de haute affinité ou un producteur élevé.

3. Isolement de cellules uniques et viabilité cellulaire – Les cellules viables uniques doivent être isolées et clonées afin de garantir que la population de cellules est génétiquement identique, ce qui réduit significativement l’hétérogénéité de l’expression.

4. Assurance de monoclonalité – Lors du développement de lignées cellulaires pour des agents biothérapeutiques, il est essentiel, d’un point de vue qualité et réglementaire, de s’assurer que la lignée cellulaire est issue d’un seul progéniteur et qu’elle est donc monoclonale. La preuve de la monoclonalité (critère réglementaire pour les lignées cellulaires thérapeutiques) est généralement documentée à partir d’images, où une image d’une cellule unique est enregistrée et incluse dans les déclarations réglementaires.

5. Titre et criblage pour la productivité de clones – Il s’agit d’un test détectant la quantité de protéine recombinante ou d’anticorps produite à partir de la lignée cellulaire dérivée du clonage.

Applications et méthodes pour le développement de lignées cellulaires