Développement de lignées cellulaires
Les lignées cellulaires stables sont largement utilisées dans de nombreuses applications importantes, notamment la production de molécules biologiques (par ex. protéines recombinantes, anticorps monoclonaux), le criblage de médicaments et les études fonctionnelles de gènes. Le processus de développement de lignées cellulaires stables commence souvent par la transfection de cellules hôtes sélectionnées, en général CHO ou HEK 293, avec les plasmides souhaités. Après la transfection, les chercheurs criblent et quantifient les clones à niveau d'expression élevé. Une fois ces producteurs importants identifiés, les lignées cellulaires et/ou les protéines produites par les cellules sont validées.
Les méthodes de criblage manuel traditionnellement utilisées pour le développement de lignées cellulaires sont longues et fastidieuses, augmentant la demande en solutions automatisées à haut débit. Le flux de travail général ci-dessous permet d’identifier les systèmes qui peuvent faciliter vos recherches.
Procédure du développement de lignées cellulaires :
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Transfection est le processus d’introduction d’un ADN étranger (codant pour la protéine recombinante d’intérêt) dans une cellule hôte. La petite population de cellules avec l’ADN étranger intégré dans leur génome qui maintient sa capacité à exprimer la protéine recombinante pendant de longues périodes correspond à des cellules transfectées de façon stable.
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Criblage des anticorps/classement des titres – Découverte et sélection de clones de haute valeur à partir d’un pool transfecté de cellules. Le criblage de vastes populations en quantifiant l’expression à la surface des cellules de la protéine d’intérêt ou sécrétant des anticorps (classement des titres) augmente la probabilité de découvrir un rare liant de haute affinité ou un producteur élevé.
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Isolement de cellules uniques et viabilité cellulaire – Les cellules viables uniques doivent être isolées et clonées afin de garantir que la population de cellules est génétiquement identique, ce qui réduit significativement l’hétérogénéité de l’expression.
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Assurance de monoclonalité – Lors du développement de lignées cellulaires pour des agents biothérapeutiques, il est essentiel, d’un point de vue qualité et réglementaire, de s’assurer que la lignée cellulaire est issue d’un seul progéniteur et qu’elle est donc monoclonale. La preuve de la monoclonalité (critère réglementaire pour les lignées cellulaires thérapeutiques) est généralement documentée à partir d’images, où une image d’une cellule unique est enregistrée et incluse dans les déclarations réglementaires.
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Titre et criblage pour la productivité de clones – Il s’agit d’un test détectant la quantité de protéine recombinante ou d’anticorps produite à partir de la lignée cellulaire dérivée du clonage.
Applications et méthodes pour le développement de lignées cellulaires
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Criblage d’expression à la surface cellulaire
De nombreuses protéines s’exprimant à la surface des cellules sont des cibles pour la découverte et le développement de produits biopharmaceutiques. Par exemple, les récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) constituent la plus grande classe de protéines de surface cellulaire et sont des cibles pour pratiquement 40 % des médicaments existants. La découverte et la sélection de clones de grand intérêt grâce à l’expression élevée à la surface cellulaire des GPCR à partir d’un pool de cellules transfectées peuvent s’avérer complexes. Le système ClonePix 2 est une méthode automatisée pour le criblage de vastes populations de cellules, augmentant ainsi la probabilité de découvrir un liant de haute affinité rare ou un producteur élevé.
- Sélection rapide et automatisée de clones de cellules mammifères par expression de protéines de surface
- Sélection et développement rapides de lignées cellulaires de mammifères exprimant un RCPG à l’aide de la nouvelle technologie ClonePix
- Sélection rapide et efficace de cellules de mammifères à productivité élevée sécrétant des protéines non-mAb
- Brochure : ClonePix2
Viabilité cellulaire
Pour développer des lignées cellulaires, il faut découvrir des clones cellulaires uniques produisant des taux élevés et constants de la protéine thérapeutique cible. Une première étape essentielle du processus consiste à isoler des cellules viables uniques. Les cellules uniques prolifèrent de manière à former des colonies, qui peuvent être évaluées pour la productivité de la protéine thérapeutique cible. La viabilité et les taux de croissance de clones cellulaires uniques peuvent être déterminés sur le CloneSelect Imager, le lecteur de microplaques SpectraMax i3x et le cytomètre d’imagerie.
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Titre et criblage pour la productivité de clones
Un élément important de l’identification des clones de valeur est la détermination de la productivité de colonies dérivées de cellules uniques. Le criblage pour la productivité au moyen d’approches traditionnelles est un processus laborieux et fastidieux, qui comporte plusieurs étapes, dont l’isolement de cellules uniques à partir d’une dilution limitante, suivie d’une évaluation du titre par ELISA. Le système ClonePix 2 combine la sélection des phénotypes, l’isolement de cellules uniques et le criblage de productivité en une seule étape, ce qui réduit considérablement le temps du criblage et augmente le nombre de candidats.
Comparaison de méthodes de clonage classique par rapport à f.sight
Comme les réglementations relatives au développement de lignées cellulaires sont de plus en plus strictes, vous devrez réaliser un clonage de cellules uniques et fournir des preuves indiquant qu’une lignée cellulaire est dérivée d’une cellule unique (preuve de clonalité). Dans cette étude, nous avons conduit six ensembles d’expériences afin de présenter un flux de travail combiné f.sight + CSI avec une assurance élevée de monoclonalité dans un seul cycle de clonage. Nous avons également comparé l’efficacité du clonage de deux lignées cellulaires CHO en suspension sur un instrument CloneSelect Single-Cell Printer f.sight par rapport à deux autres méthodes de clonage classiques acceptées, la cytométrie en flux et la dilution limitante.
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Assurance de monoclonalité
Le développement de lignées cellulaires et l’assurance de monoclonalité constituent des étapes essentielles du processus de génération de molécules biopharmaceutiques, telles que les anticorps monoclonaux. Une lignée cellulaire peut être établie après l’isolation d’une cellule viable unique exprimant fortement la protéine d’intérêt. La documentation de preuves de clonalité est l’une des étapes clés de ce processus. Cette preuve de clonalité est généralement documentée à partir d'images, où une image d’une cellule unique est générée et inclue dans les déclarations réglementaires.
- Identification en toute confiance de cellules CHO-S monoclonales cultivées en milieu semi-solide
- Méthodes rapides de vérification de la monoclonalité pour renforcer le développement de lignées cellulaires
- Clonalité en toute confiance en utilisant la calcéine AM avec un effet minimal sur la viabilité
- Brochure : CloneSelect Imager
Tri de cellules uniques
Pour développer des lignées cellulaires, il faut découvrir des clones cellulaires uniques produisant des taux élevés et constants de la protéine thérapeutique cible. La première étape du processus est l’isolation des cellules uniques viables. La dilution limitante, une technique s’appuyant sur la probabilité statistique, requiert beaucoup de temps. L’imprimante CloneSelect Single-Cell Printer permet d’isoler facilement les cellules de façon à optimiser la viabilité cellulaire, tout en fournissant des preuves directes de clonalité par le biais de séries de cinq images capturées durant la distribution des cellules.
- Flux de travail d’imagerie sur microplaque et impression de cellules uniques basé sur lamicrofluidique optimisé pour l’efficacité, la viabilité et la génération de rapports de monoclonalité
- Un flux de travail associant l’isolement de cellules uniques et l’imagerie sur microplaque améliore le rendement du clonage avec une assurance de clonalité supérieure
- Brochure : Imprimante à cellule unique CloneSelect
Ressources sur le développement de lignées cellulaires
Note d'application
Flux de travail d’imagerie sur microplaque et impression de cellules uniques basé sur lamicrofluidique optimisé pour l’efficacité, la viabilité et la génération de rapports de monoclonalité
A microfluidics-based, single cell printing and microplate imaging workflow optimized for efficiency, viability and monoclonality report generation
Dans cette note d’application, nous présentons un flux de travail unifié qui associe le dépôt de cellules uniques et la vérification de la clonalité. Nous couplons l’utilisation de SCP et de CSI pour déposer des cellules uniques dans…
Brochure
ClonePix 2
ClonePix 2
Découvrez ClonePix 2 de Molecular Devices qui permet de cribler davantage de clones en moins de temps grâce à ses caractéristiques automatiques et précises de sélection de colonies.
Fiche technique
Série d’imprimantes à cellule unique CloneSelect
CloneSelect Single-Cell Printer Series
La série d’imprimantes CloneSelect™ Single-Cell Printer™ dépose des cellules uniques avec précaution et haut rendement grâce à une cartouche jetable à distribution unidirectionnelle, style jet d’encre, brevetée.
Brochure
Fonction Rapport de monoclonalité de l'imageur CloneSelect
CloneSelect Imager Monoclonality Report Feature
L’apport de preuves en images de monoclonalité dans le processus de développement de lignées cellulaires ne se résume pas à l’exportation d’une image d’une cellule unique. Par exemple, des images haute résolution du puits entier…
Note d'application
Mesure de la viabilité cellulaire et de la cytotoxicité avec le kit EarlyTox™ d’Intégrité Cellulaire
Measuring cell viability and cytotoxicity with the EarlyTox Cell Integrity Kit
Le kit d’intégrité cellulaire EarlyTox™ est un ensemble optimisé de réactifs qui simplifie l’identification des cellules vivantes et mortes. Il peut être utilisé pour mesurer les effets de différents traitements sur…
Note d'application
Comparaison des méthodes de clonage traditionnelles vs. l’imprimante CloneSelect Single-Cell Printer f.sight en utilisant les lignées cellulaires CHO couramment utilisées pour la production d’anticorps monoclonaux
Comparison of traditional cloning methods vs. CloneSelect Single-Cell Printer f.sight using CHO cell lines commonly used for monoclonal antibody production
Dans la mesure où les réglementations relatives au développement de lignées cellulaires sont de plus en plus strictes, vous devrez réaliser un clonage de cellules uniques et fournir des preuves indiquant qu’une lignée cellulaire dérive …
Note d'application
Un flux de travail associant l’isolement de cellules uniques et l’imagerie sur microplaque améliore le rendement du clonage avec une assurance de clonalité supérieure
A workflow combining single-cell isolation and microplate imaging improves cloning efficiency with higher assurance of clonality
L’isolement de cellules uniques a de nombreuses applications allant de la génomique à cellule unique à la détection d’anticorps en passant par le développement de lignées cellulaires.
Note d'application
Clonalité en toute confiance en utilisant la calcéine AM avec un effet minimal sur la viabilité
Confident assurance of clonality using calcein AM with minimal effect on viability
Le développement de lignées cellulaires qui expriment une protéine spécifique d’intérêt est essentiel à la génération de molécules biopharmaceutiques, telles que les anticorps monoclonaux. Pour établir une…cellule...
Affiche scientifique
Criblage et sélection rapides de clones stables à productivité élevée
Rapid Screening and Selection of Stable High Producing Clones
Le criblage de populations cellulaires pour des clones stables à productivité élevée est une étape limitante mais essentielle dans le développement et la production de nouvelles protéines thérapeutiques.
Affiche scientifique
Méthodes rapides de vérification de la monoclonalité pour renforcer le développement de lignées cellulaires
Rapid Monoclonality Verification Methods to Boost Cell Line Development
Ici, nous présentons une méthode par fluorescence pour l’identification des cellules CHO-S monoclonales en utilisant CellTracker Green CMDFA.
Note d'application
Sélection rapide et efficace de cellules de mammifères à productivité élevée sécrétant des protéines non-mAb
Rapid and efficient selection of high producing mammalian cells secreting non-mAb proteins
La technologie utilisée par les systèmes ClonePix élimine le recours à la dilution en série ou à des techniques de tri de cellules. Cela permet d’établir des populations monoclonales de cellules super-sécrétrices dans un…
Note d'application
Optimisation automatisée de la production d'IgG dans des cellules CHO
Automated Optimization of IgG Production in CHO Cells
Les anticorps monoclonaux constituent un outil essentiel depuis longtemps pour les tests cellulaires et moléculaires et ont été intégrés dans la pratique clinique lors de la transition depuis les petites molécules dans les traitements biologiques pour…
Note d'application
Identification en toute confiance de cellules CHO-S monoclonales cultivées en milieu semi-solide avec le CloneSelect Imager
Confident Identification of Monoclonal CHO-S Cells Grown in Semi-Solid Media using the CloneSelect Imager
Les critères réglementaires pour obtenir l’autorisation de mise sur le marché des médicaments biologiques évoluent en permanence. L’un des critères réglementaires pour les lignées cellulaires biologiques, la documentation numérique de la monoclonalité, a…
Note d'application
Création de courbes de confluence et de croissance sur le CloneSelect Imager
Confluence and growth curve generation on the CloneSelect Imager
La capacité de suivi de la prolifération cellulaire est de plus en plus importante, particulièrement avec l’utilisation accrue des lignées cellulaires in vitro en tant que systèmes modèle. Les taux de prolifération peuvent être utilisés pour…
Note d'application
Sélection rapide et automatisée de clones de cellules mammifères par expression de protéines de surface
Rapid automated selection of mammalian cell colonies by cell surface protein expression
La capacité de sélection des cellules fondée sur l’expression des protéines de surface présente un grand intérêt pour l’établissement de lignées cellulaires exprimant le ou les récepteurs d’intérêt pour le phénotypage/génotypage en aval,…
Note d'application
Sélection et développement rapides de lignées cellulaires de mammifères exprimant un RCPG à l’aide de la nouvelle technologie ClonePix
Rapid selection and development of GPCR expressing mammalian cell lines using novel ClonePix Technology
La détection et la sélection de clones de GPCR à niveau d’expression élevé à partir d’un pool de cellules transfectées peut s’avérer une étape complexe lors du développement de lignées cellulaires. La technologie des systèmes ClonePix 2…
Note d'application
Amélioration du développement d'hybridomes spécifiques d’un virus en utilisant les technologies d'imagerie ClonePix et CloneSelect Imager
Enhanced development of virus-specific hybridomas using ClonePix and CloneSelect Imager Technologies
Le système ClonePix a été utilisé dans le criblage haut débit de centaines de colonies sous-clonées à partir d’un matériel d’hybridome parental (historiquement, les rendements de lignées parentales étaient inférieurs à 1 mg/…
Note d'application
Tests de viabilité cellulaire en luminescense et de cytotoxicité sur le lecteur de microplaques multimode SpectraMax i3x
Luminescent cell viability and cytotoxicity assays on the SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader
Le test CellTiter-Glo de Promega utilise l’enzyme luciférase, qui nécessite de l’ATP pour générer de la lumière. Le signal luminescent produit durant le test dépend de la quantité d’ATP dans…
Brochure
Plate-forme de détection multi-mode SpectraMax i3x
SpectraMax i3x Multi-Mode Detection Platform
Le lecteur de microplaques multimode SpectraMax i3x effectue des analyses spectrales d’absorbance, de fluorescence et de luminescence. Une fonctionnalité de mises à jour modulaires est ajoutée pour le Western Blot, l’imagerie…
Vidéos et webinaires

Flux de travail sur la sélection de cellules de mammifères à productivité élevée sécrétant des protéines non mAb - Présentation rapide de SynBioBeta

Les flux de travail nombreux et variés de développement de lignées cellulaires