Détection d’anticorps monoclonaux (mAb)
Les anticorps monoclonaux (mAb) sont issus d’une cellule parent unique et ne se lient donc qu’à un seul épitope. La détection d’anticorps monoclonaux renvoie généralement au criblage et à l’identification d’anticorps spécifiques qui ciblent un épitope spécifique pour le diagnostic et le traitement de maladies, comme le coronavirus pour la COVID-19.
Il existe plusieurs méthodes pour générer des mAb thérapeutiques. Deux des méthodes de production les plus courantes sont les hybridomes et l'affichage de phage.
Production de mAb à l’aide d’hybridomes
Dans cette méthode, les scientifiques fusionnent des cellules de myélome immortalisées avec des splénocytes obtenus chez des animaux préalablement exposés à l’antigène d’intérêt. La cellule fusionnée qui en résulte est appelée un hybridome. L’avantage d’un hybridome est qu’il possède la capacité de produire des mAb tout en se divisant indéfiniment, alors que les splénocytes ont une durée de vie limitée. Les chercheurs criblent ensuite des centaines d’hybridomes afin identifier les meilleurs d’entre eux en fonction de la spécificité de l’antigène et la classe d’immunoglobuline. Ces candidats sont par la suite analysés, caractérisés et cultivés à grande échelle pour des procédés ultérieurs.
Production de mAb par affichage de phage
Dans cette méthode, les gènes variables des chaînes lourdes et légères d’un anticorps sont introduits dans un gène codant pour une des protéines de l’enveloppe du bactériophage. Ainsi, les phages exprimeront les gènes de l'anticorps et cet anticorps sera exposé à la surface du phage. Grâce à cette stratégie, les chercheurs peuvent créer une banque présentant des millions d’anticorps différents. Ces phages présentant l’anticorps sont ensuite criblés contre l’antigène d’intérêt, et ceux qui sont hautement spécifiques sont identifiés, isolés puis caractérisés de manière encore plus précise pour leur utilisation lors de travaux ultérieurs.
Comment les anticorps monoclonaux sont-ils produits ?
La production traditionnelle d’anticorps monoclonaux commence généralement par la génération de cellules productrices de mAb (c'est-à-dire des hybridomes) en fusionnant des cellules de myélome avec les splénocytes producteurs d’anticorps souhaités (par ex., des cellules B). Ces cellules B sont habituellement extraites d’animaux, généralement de souris. Après la fusion cellulaire, un grand nombre de clones est criblé et sélectionné en fonction de la spécificité de l’antigène et de la classe d’immunoglobuline. Une fois les lignées cellulaires d'hybridome candidates identifiées, chaque « correspondance » est reconfirmée, validée et caractérisée à l’aide de plusieurs tests de fonctionnalité en aval. Cette étape terminée, les clones sont cultivés à grande échelle à l'aide de bioprocédés supplémentaires.
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Développement de lignées cellulaires
Le développement de lignées cellulaires est une étape essentielle du processus de génération de molécules biopharmaceutiques, telles que les anticorps monoclonaux. Le processus commence souvent par la transfection du type de cellule hôte avec l’ADN codant pour la protéine thérapeutique d’intérêt, ce qui permet une intégration aléatoire ou dirigée de l’ADN cible dans le génome de la cellule hôte. Des milliers de clones sont criblés pour isoler les cellules rares qui présentent une productivité élevée, ce qui est un processus manuel fastidieux.
Développement de lignées cellulaires
Le développement de lignées cellulaires est une étape essentielle du processus de génération de molécules biopharmaceutiques, telles que les anticorps monoclonaux. Le processus commence souvent par la transfection du type de cellule hôte avec l’ADN codant pour la protéine thérapeutique d’intérêt, ce qui permet une intégration aléatoire ou dirigée de l’ADN cible dans le génome de la cellule hôte. Des milliers de clones sont criblés pour isoler les cellules rares qui présentent une productivité élevée, ce qui est un processus manuel fastidieux.
Comparaison de méthodes de clonage classique par rapport à f.sight
Dans cette étude, nous avons conduit six ensembles d’expériences, en clonant deux lignées cellulaires CHO avec des milieux de culture cellulaire et des compléments sans composant d’origine animale (ACF), et nous avons comparé la performance d’un instrument CloneSelect Single-Cell Printer à celle de deux autres méthodes de clonage acceptées (FC et LD).
Visionner notre vidéo de présentation et télécharger la note d’application.
Comparaison de méthodes de clonage classique par rapport à f.sight
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Identification en toute confiance de cellules CHO-S monoclonales
La culture des cellules CHO dans CloneMedia CHO Growth A constitue une façon plus efficace de cloner des cellules CHO que la réalisation d’une dilution limitante dans un milieu liquide. Le milieu semi-solide immobilise les cellules, ce qui les empêche de se déplacer pendant la manipulation de routine. Cela permet aux chercheurs de suivre en toute confiance la croissance d’une seule cellule dans une colonie.
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eBook : Optimisez vos lignées cellulaires de grand intérêt
Dans ce livre électronique, nous présentons le flux de travail de développement de lignées cellulaires, ainsi que des solutions haut début pour accélérer le processus et permettre une sélection plus facile et plus rapide des lignées cellulaires de mammifère à productivité élevée.
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Développement amélioré d’hybridomes spécifiques d’un virus
Les virus à ADN double brin (ADNdb) provoquent de nombreuses maladies chez l’homme. Les espèces de l’ordre de Herpesvirus et les familles Adénovirus et Papillomavirus peuvent causer des symptômes chez l’homme avec des tableaux cliniques similaires. En outre, la confirmation du diagnostic au niveau sérologique ou protéique pour un virus particulier peut être compliquée en raison de la conservation des antigènes dans les génomes viraux. Un degré élevé d’homologie protéomique et des réactions croisées dans le sérum conduisent à une différenciation médiocre entre les espèces individuelles de virus à ADNdb. L’objectif de la recherche était d’identifier une lignée cellulaire à productivité optimale sécrétant un anticorps monoclonal hautement spécifique ne causant pas de réaction croisée pouvant être utilisée dans le développement d’agents biothérapeutiques.
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Sélection d’hybridomes à l’aide d’un milieu HAT
La sélection d'hybridomes après la fusion des myélomes et des cellules de rate est une étape critique dans la production d'anticorps monoclonaux. Souvent, les chercheurs utilisent la méthode HAT (hypoxanthine-aminoptérine-thymidine) pour accomplir cette tâche.
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Technologie d’hybridome
La technologie des hybridomes est une méthode de production en masse d’anticorps dans une lignée cellulaire hybride générée à partir de la fusion de lymphocytes B produisant des anticorps avec une lignée cellulaire de myélome immortalisée, que l’on appelle à présent cellule d'hybridome. Comme chaque lymphocyte B produit un anticorps unique, le clonage de cellule unique d'hybridomes peut être utilisé pour générer une bibliothèque diversifiée d’anticorps monoclonaux uniques à grande échelle, lesquels sont très fréquemment utilisés dans la prévention, le diagnostic et le traitement des maladies.
Technologie d’hybridome
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Monoclonalité
Le développement de lignées cellulaires et l’assurance de la monoclonalité constituent des étapes essentielles du processus de génération de molécules biopharmaceutiques, telles que les anticorps monoclonaux. Une lignée cellulaire peut être établie après l’isolation d’une cellule viable unique exprimant fortement la protéine d’intérêt. La documentation de preuves de clonalité est l’une des étapes clés de ce processus. Cette preuve de clonalité est généralement documentée à partir d'images, où une image d’une cellule unique est générée et inclue dans les déclarations réglementaires.
Monoclonalité
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Phage Display
L'affichage de phage est une technique utilisée pour étudier l’interaction des protéines qui s’affichent à la surface d’un bactériophage avec d’autres molécules telles que des peptides, de l’ADN et d’autres protéines. L'affichage de phage est couramment utilisé pour détecter les interactions de haute affinité entre les anticorps et les antigènes, lesquels jouent un rôle essentiel dans la pathogenèse virale, les vaccins et d’autres traitements.
Phage Display
L'affichage de phage est une technique utilisée pour étudier l’interaction des protéines qui s’affichent à la surface d’un bactériophage avec d’autres molécules telles que des peptides, de l’ADN et d’autres protéines. L'affichage de phage est couramment utilisé pour détecter les interactions de haute affinité entre les anticorps et les antigènes, lesquels jouent un rôle essentiel dans la pathogenèse virale, les vaccins et d’autres traitements.
préparation et ensemencement de cellules dans un milieu semi-solide
La mise en plaque des cellules dans le milieu semi-solide visqueux peut être difficile pour les utilisateurs non expérimentés. Regardez notre tutoriel de 4 minutes pour quelques conseils sur la façon d’étaler plus efficacement les cellules dans ce milieu.
préparation et ensemencement de cellules dans un milieu semi-solide
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