Découverte d’anticorps en utilisant l'expression des phages
Phage Display
L'affichage de phage est une technique utilisée pour étudier l’interaction des protéines qui s’affichent à la surface d’un bactériophage avec d’autres molécules telles que des peptides, de l’ADN et d’autres protéines. L'expression de phages est couramment utilisée pour identifier les interactions de haute affinité entre les anticorps et les antigènes, lesquelles jouent un rôle essentiel dans la pathogenèse virale, les vaccins et d’autres traitements.
Regardez la vidéo avec Rebecca Kreipke, Chercheur spécialiste des applications sur le terrain. Elle présente notre solution d'accélération de votre flux de travail Affichage de phage.
Flux de travail affichage de phage
Solutions automatisées pour augmenter l’efficacité des flux de travail de votre affichage de phage
Le flux de travail Phage Display est une méthode robuste, facile à utiliser et peu onéreuse permettant d’identifier des ligands antigéniques de haute affinité spécifiques à partir de vastes bibliothèques combinatoires contenant jusqu’à plusieurs milliards d’anticorps potentiellement pertinents d’un point de vue clinique. Il peut donc très facilement bénéficier de l’ajout de solutions automatisées, qui vous permettront de réduire l’effort manuel requis pour identifier vos anticorps cibles les plus prometteurs et accélérer les découvertes.
Étapes de l'affichage de phage
Étape 1 : Adhérence sur plastique, "panning"
Le panning est un procédé itératif d’enrichissement des phages dans une population qui présente une liaison de haute affinité pour une cible d’intérêt par rapport à d’autres. Commencez par enrichir votre population de phages avec une liaison haute affinité en exposant la bibliothèque à votre antigène de choix, puis en éluant et en amplifiant uniquement ceux ayant l’affinité de liaison la plus élevée.
Étape 2 : Repiquage de colonies
Le bactériophage sélectionné lors de l’étape précédente est alors cloné et sélectionné afin d’isoler chaque liant protéique unique.
Étape 3 : Interactions antigènes-anticorps
Pendant le panning, les phages exprimant des protéines avec une liaison de haute affinité sont sélectionnés par rapport aux phages exprimant des protéines de moindre affinité. Ce processus de sélection qualitative requiert une validation au moyen de tests immunologiques plus quantitatifs afin d’évaluer les interactions anticorps-antigènes comme les tests ELISA, l’immunofluorescence, le HTRF, la fixation du complément, l’agglutination et/ou la précipitation.
Étape 4 : Criblage fonctionnel
Suite à la caractérisation des interactions anticorps-antigènes, les molécules candidates sont criblées pour déterminer leur activité fonctionnelle (p. ex., neutralisation virale ou efficacité du vaccin), souvent au moyen de tests cellulaires.
Technologie Affichage de phage pour la production d’anticorps
Le système QPix™ accélère le flux de travail pour cribler l’anticorps de l'affichage de phage
Les applications industrielles, allant de la biotechnologie à la biologie de synthèse, utilisent l'affichage de phage en raison de ses capacités de haut débit pour la détermination de l’interaction des protéines et l’ingénierie des protéines. Toutefois, afin de sélectionner des liants ou ligands haute affinité, qui peuvent reconnaître une cible naïve dans une bibliothèque de phages (environ 107 à 1012), les bactériophages sans liaison doivent être éliminés, et les phages qui se lient spécifiquement aux molécules cibles sont élués et récoltés au moyen de 3 à 5 étapes de panning. Cela peut être difficile à réaliser en utilisant des méthodes traditionnelles lors du criblage de multiples sélections simultanément avec différents antigènes. Pour accélérer leur criblage d’anticorps d'affichage de phage, les chercheurs intègrent de nouvelles technologies comme les systèmes QPix™ dans leur flux de travail.
Le système QPix est idéal pour l’automatisation de la mise sur plaque et de la sélection des clones, tout comme le système complet de gestion des bibliothèques de phages.
- Sélection à une vitesse de 3000 clones par heure avec plus de 98 % d’efficacité.
- 8 heures de fonctionnement sans surveillance par jour
- Criblez et sélectionnez jusqu’à 30 000 colonies par jour
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