Recherche sur le vaccin contre le coronavirus SARS-CoV-2 (COVID-19)

Numération cellulaire/viabilité cellulaire

La numération cellulaire et la viabilité cellulaire sont des évaluations fondamentales dans de nombreuses études biologiques, notamment de nombreuses applications en virologie telles que le titre viral et l’infectiosité. La microscopie cellulaire est couramment utilisée pour capturer des images en fond clair et par fluorescence des cellules afin de les compter et de déterminer si elles sont respectivement vivantes ou mortes.

• Coloration des cellules vivantes/mortes (Kit de test EarlyTox™ Live/Dead) - Mesure de la viabilité cellulaire et de la cytotoxicité avec le kit EarlyTox™ d’Intégrité Cellulaire
• Test MTT - Évaluez la viabilité et la prolifération cellulaires avec des lectures colorimétriques
• Efficacité de la transfection - Optimisation de la transfection GFP avec la plate-forme de détection multimode SpectraMax i3.
• Prolifération cellulaire (croissance cellulaire) - Création de courbes de confluence et de croissance sur le CloneSelect Imager
• Viabilité cellulaire (Test de viabilité cellulaire en luminescence CellTiter-Glo®) - Tests de viabilité cellulaire en luminescense et de cytotoxicité sur le lecteur de microplaques multimode SpectraMax i3x

Développement de lignées cellulaires

Pour développer des lignées cellulaires, il faut découvrir des clones dérivés de cellules uniques produisant des taux élevés et constants de la protéine thérapeutique cible présentant les attributs de qualité souhaités, qu’il est possible d’intensifier pour la production GMP commerciale.

• Repiquage de colonies - Amélioration du développement d'hybridomes spécifiques d’un virus en utilisant les technologies d'imagerie ClonePix et CloneSelect Imager
• Vérification de monoclonalité - Clonalité en toute confiance en utilisant la calcéine AM avec un effet minimal sur la viabilité
• Tri cellulaire - Un flux de travail associant l’isolement de cellules uniques et l’imagerie sur microplaque améliore le rendement du clonage avec une assurance de clonalité supérieure
• Knock-in/out de lignées cellulaires - Validez les cellules éditées par CRISPR à l’aide de l’imagerie et de la détection par Western Blot sur un lecteur de microplaques

Solutions de recherche sur la COVID-19

Molecular Devices s’engage à vous soutenir dans vos recherches sur les réponses cellulaires à la COVID-19 et le développement d’un vaccin en vous proposant des technologies et solutions que vous pouvez déployer rapidement. Nous proposons des solutions de laboratoire validées et conformes, notamment des lecteurs de microplaques, des laveurs, ainsi que des systèmes biopharmaceutiques et d’imagerie cellulaire, afin de répondre à tous vos besoins en recherche.

Lien vers la recherche sur la COVID-19  

Dosages des luciférases

Les luciférases sont des enzymes qui utilisent un substrat appelé luciférine, ainsi que de l’oxygène et de l’ATP, dans un processus énergétique qui génère de la lumière, comme la lueur jaune des lucioles. Le pouvoir des luciférases a été exploité par des chercheurs afin d’élaborer des réactions dont la génération de lumière est utilisée pour surveiller les processus biologiques, notamment l’expression des gènes, la liaison biomoléculaire et la viabilité cellulaire.

Voici quelques notes d’application sur les dosages des luciférases pour faciliter vos recherches afin de découvrir un vaccin contre la COVID-19 :

• Mesure de l’expression de la luciférase à l’aide du kit de test gène rapporteur SpectraMax Glo Steady-Luc.
• Dosage des gènes rapporteurs dual Luciférase (DLR)
• Surveillez l'activation NF-κB à l'aide d'un test du gène rapporteur dual luciférase
• Détectez l’expression de la dual Luciférase
• Détection extrêmement sensible de la dual luciférase à l’aide du kit de test gène rapporteur SpectraMax DuoLuc

Affinité de liaison protéine/antigène

L’affinité de liaison est une mesure de la force avec laquelle deux molécules (souvent une paire anticorps/antigène) interagissent l’une avec l’autre. De nombreux types différents de test ont été développés pour évaluer l’affinité de liaison en raison de l’hétérogénéité significative entre les protéines, notamment en ce qui concerne leur taille, leur localisation, leur solubilité et de nombreuses autres caractéristiques.

Découvrez les applications courantes pour l’affinité de liaison protéine/antigène :

• ELISA (IgG/IgM) - Dosage d’immunoabsorption enzymatique (ELISA)
• Liaison cellulaire - Augmentation de la sensibilité des tests sans étape de lavage grâce à l’imagerie confocale
• HTRF- Services de profilage HTRF sur le lecteur de microplaques multimode SpectraMax iD5
• AlphaScreen/AlphaLISA - Écran AlphaLISA sur la plateforme de détection de microplaque multimode SpectraMax Paradigm

Quantification des protéines et acides nucléiques (non spécifiques)

Les protocoles expérimentaux impliquent de nombreuses préparations d’échantillons à analyser. Toutefois, ils allongent également les délais afin de garantir la qualité. Il est possible d’équilibrer la vitesse et l’assurance qualité grâce à des méthodes de quantification non spécifiques. Les quantités totales de protéines et/ou d’acides nucléiques peuvent être mesurées par absorbance UV sur un lecteur de microplaques.

• Dosages colorimétriques des protéines (dosages BCA/Bradford) - Mesurer les protéines totales dans des lysats cellulaires avec le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus
• Quantification des protéines (par absorbance UV) - Quantification directe des protéines avec la microplaque à micro-volume SpectraDrop
• Quantification de l’ADN/ARN (par absorbance UV) - Mesures d'absorbance ADN et ARN avec les lecteurs de microplaques SpectraMax
• Quantification de l’ADN par fluorescence - Quantification d’échantillons d’ADN double brin à l’aide des kits de test d’ADNdb SpectraMax Quant

Quantification des protéines et acides nucléiques (spécifiques)

De nombreuses études biologiques ont pour objectif d’altérer l’expression des protéines dans une cellule, que ce soit par ingénierie génétique ou traitement médicamenteux. Afin de comprendre l’effet d’une telle manipulation, il est essentiel de mesurer la réponse de la ou des protéines spécifiques. Des anticorps sont généralement utilisés dans les tests biologiques (tests immunologiques) à cette fin en raison de leur capacité intrinsèque à se lier spécifiquement à une protéine d’intérêt.

• ELISA (sécrétion des cytokines) - Dosage d’immunoabsorption enzymatique (ELISA)
• Western Blot - Western Blot
• HTRF (sécrétion des cytokines) - Normaliser les dosages des cytokines HTRF pour la viabilité cellulaire
• AlphaScreen/AlphaLISA - Écran AlphaLISA sur la plateforme de détection de microplaque multimode SpectraMax Paradigm
• ValitaTITER (quantification des IgG par polarisation de fluorescence ) - Optimisez le flux de travail de la mesure des IgG dans le développement des lignées cellulaires

Flux de travail du développement d’un vaccin

Les flux de travail du développement d’un vaccin varient selon la plateforme choisie (p. ex., virus inactivé vs. vaccin à ADN) , chacune ayant ses propres avantages. Ici, nous avons abordé divers flux de travail se rapportant aux virus, de la détection d’antigènes et d’anticorps au développement de lignées cellulaires.

• Flux de travail de découverte d’antigènes/immunogènes
• Découverte d’anticorps : flux de travail sur l'expression des phages
• Découverte d’anticorps : flux de travail du criblage des hybridomes
• Flux de travail sur les lignées cellulaires stables

Neutralisation virale

Les efficacités des vaccins et des médicaments antiviraux sont évaluées par leur capacité à inhiber l’entrée virale (infection) dans des cellules mises en culture.

• Test de neutralisation par réduction des plaques (PRNT)
• Test de neutralisation par réduction virale (VRNT) - Test de neutralisation de réduction de virus: Essai de neutralisation de virus à haut débit avec imagerie de cellules uniques contre la dengue
• Micro-neutralisation    Développement d'un essai de microneutralisation à haut débit des foyers de fluorescence du virus syncytial respiratoire

Pathogenèse virale (voies virales)

Il est essentiel de comprendre les mécanismes de base de l’entrée virale, de la réplication, de l’excrétion virale, etc. pour pouvoir développer des traitements efficaces contre les maladies infectieuses. La microscopie à fluorescence est un outil fondamental dans tous les laboratoires de virologie, car elle permet de visualiser les voies virales avec une haute résolution et dans le temps. La signalisation cellulaire et les dosages des gènes rapporteurs peuvent être utilisés pour étudier les voies de signalisation cellulaire affectées par les virus et sont exécutés sur des lecteurs de microplaques.

• Internalisation - Visualisation des vésicules infra-cellulaires pour la quantification de l’autophagie des cellules neuronales
• Essais par gènes rapporteurs - Mesure de l’expression de la luciférase à l’aide du kit de test gène rapporteur SpectraMax Glo Steady-Luc.
• Signalisation cellulaire (GPCR) - Réaliser une solution de flux de travail cAMP en utilisant le Kit de test fluorescent CatchPoint cAMP

Titre viral

Les virus infectent les cellules afin de se répliquer, tâche qu’ils ne peuvent accomplir seuls. La mesure de la quantité de virus dans un échantillon sans cellules ne fournit pas d’information sur l’infectiosité, ce qui limite son utilité. À la place, l’imagerie cellulaire est utilisée pour détecter la capacité d’un virus donné à infecter des cellules en culture. Les concentrations virales sont déterminées à partir de la fraction des cellules infectées.

• Essai sur plaque - L’Université de Zurich utilise le système à large champ ImageXpress pour étudier les interactions hôte-pathogène
• Test de formation de foyers
• Dilution en point final