Qu’est-ce qu’un dosage ELISA ?
Le test ELISA (dosage d’immunoabsorption enzymatique) est une méthode utilisée pour détecter de façon quantitative un antigène dans un échantillon. Un antigène est une toxine ou une autre substance étrangère, par exemple, un virus de la grippe ou un contaminant environnemental, qui provoque une réaction de défense par le système immunitaire des vertébrés. La plage des antigènes potentiels est vaste. Par conséquent, les dosages ELISA sont utilisés dans de nombreux domaines de recherche et essais pour détecter et quantifier les antigènes dans un grand nombre d’échantillons. Les lysats cellulaires, les prélèvements de sang, les aliments, et bien plus encore, peuvent être analysés avec des dosages ELISA pour rechercher des substances spécifiques d’intérêt.
Il existe quatre principaux types de test ELISA : direct, indirect, compétitif et sandwich. Chaque type est décrit ci-dessous avec un schéma illustrant la façon selon laquelle les analytes et les anticorps sont liés et utilisés.
Étapes pour exécuter un dosage ELISA de type sandwich
La plupart des tests ELISA de type sandwich sont exécutés dans des microplaques, le fond des puits des microplaques servant de surface solide à laquelle se fixent les anticorps et d’autres réactifs. Un laveur de microplaques est utilisé pour éliminer les substances non spécifiques se trouvant dans les puits, et un lecteur de microplaques ELISA à absorbance détecte la variation de couleur produite lorsque l’antigène cible est présent. Un logiciel pour lecteurs de microplaques est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats.
L’illustration ci-dessous montre un flux de travail pour un test ELISA de type sandwich courant :
Étape 1 : Capturer l’anticorps fixé aux puits de la plaque ELISA.
Étape 2 : Ajouter l’échantillon dans le puits : l’antigène présent dans l’échantillon se fixe à l’anticorps de capture.
Étape 3 : Laver la microplaque : le matériau non lié est éliminé, ne laissant que l’antigène d’intérêt.
Étape 4 : Ajouter l’anticorps de détection : l’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt.
Étape 5 : Laver la microplaque : les anticorps non liés sont éliminés, ne laissant que les anticorps spécifiques à la cible d’intérêt.
Étape 6 : Ajouter le substrat : le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur.
Étape 7 : Lire la plaque : le lecteur de microplaques détecte la réaction colorée et indique les valeurs de densité optique (DO).
Étape 8 : Calculer les résultats : la quantité d’antigène est calculée et analysée dans chaque échantillon.
Bien qu’un test ELISA soit facile à mettre en place, la procédure de test est fastidieuse et laborieuse. L’automatisation de laboratoire pour des flux de travail sur plaque haut débit peut permettre de réduire le temps d’attente, d’augmenter le débit, l’efficacité et le rendement de la procédure de test, ainsi que sa reproductibilité.
Tests ELISA et applications
Le dosage d’immunoabsorption enzymatique est une technique d’analyse couramment utilisée dans de nombreux laboratoires de recherche et de biotech. Voici ci-dessous un ensemble de notes d’application, de recherches et de technologies concernant des dosages et des applications ELISA significatifs.
Dernières ressources
Flux de travail d’un protocole ELISA
Le flux de travail d’un protocole ELISA de type sandwich habituel comporte plusieurs étapes d’ajout de réactif, d’incubation et de lavage. Ici, nous mettons en avant chaque étape et les instruments et outils nécessaires pour exécuter le test ELISA, notamment un laveur de microplaques, un lecteur de microplaques ELISA à absorbance et un logiciel.
Flux de travail : Protocole de dosage ELISA
L’ANTICORPS DE CAPTURE SE FIXE AUX PUITS
Tout d’abord, l’anticorps de capture se lie au fond du puits de la microplaque.
Microplaque ELISA
La plupart des tests ELISA sont exécutés dans des microplaques à 96 ou 384 puits, une microplaque à 96 puits étant la plus courante (parfois appelée microplaque ELISA). Le fond des puits de la microplaque sert de surface solide à laquelle les anticorps et d'autres réactifs se fixent. Des microplaques sont généralement incluses dans un kit ELISA.
Vous souhaitez des résultats ELISA plus rapides ?
Les kits ELISA CatchPoint SimpleStep permettent d’obtenir des résultats en seulement 90 minutes !
AJOUTER UN ÉCHANTILLON
L’échantillon est ajouté au puits, et l’antigène présent dans l’échantillon se lie à l’anticorps de capture.
LAVER LA MICROPLAQUE
La substance non liée est éliminée, ne laissant que l’antigène d’intérêt et minimisant le risque de signal de fond élevé.
https://vids.moleculardevices.com/watch/db2tLDgnn3Bk9GpUSQ4VzQ
Laveur de microplaques
Le laveur de microplaques MultiWash+™ est un laveur automatisé, compact, silencieux et efficace à 96 et 384 puits avec 20 options de protocole de lavage différentes.
Faites des économies grâce à cette offre
Économisez du temps et de l’argent grâce à une offre de lecteur de microplaques SpectraMax avec SoftMax Pro Software et un laveur de microplaques AquaMax.
AJOUTER UN ANTICORPS DE DÉTECTION
L’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt, ce qui permet de détecter l’antigène.
LAVER LA MICROPLAQUE
Les anticorps non liés sont éliminés par lavage, ne laissant que les anticorps spécifiques de la cible d’intérêt et minimisant à nouveau le risque de signal de bruit de fond.
https://vids.moleculardevices.com/watch/vGfoof4ysIDAd4XGwxqokQ
Laveur de microplaques ELISA
Laveur de microplaques AquaMax : L’aspiration et la distribution des 96 et 384 puits se font simultanément dans tous les puits, ce qui permet d’avoir des tests de grande précision et un traitement plus rapide des microplaques sans indexage mécanique des plaques ni traitement en quadrant.
AJOUTER UN SUBSTRAT
Le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur, avec une intensité proportionnelle à la quantité d’antigène présente.
Selon l’enzyme et le substrat utilisés, la lecture peut également être fluorescente ou luminescente.
LIRE LA MICROPLAQUE
Le lecteur de microplaques détecte le produit réactionnel coloré et indique les valeurs de densité optique (D.O.) qui reflètent la quantité de lumière absorbée par les contenus de chaque puits.
https://vids.moleculardevices.com/watch/2tKEp18eNj6v1e31bfJwAe
Lecteur de microplaques ELISA
Un lecteur de plaques ELISA, comme le lecteur de plaques ELISA en absorbance SpectraMax ABS Plus, détecte le changement de couleur produit lorsque l’antigène cible est présent. Cela est possible en mesurant la quantité de lumière ayant traversé les puits de la microplaque qui est absorbée par la matière se trouvant dans les puits. Plus la quantité d’antigène présente est importante, plus la valeur d’absorbance est élevée.
https://vids.moleculardevices.com/watch/2tKEp18eNj6v1e31bfJwAe
Logiciel pour lecteurs de plaques ELISA
Un logiciel pour lecteurs de plaques ELISA, comme notre logiciel d’analyse de données SoftMax Pro, est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats à partir des valeurs d’absorbance fournies par le lecteur de microplaques.
Une courbe d’étalonnage est exécutée afin que la quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon puisse être calculée avec exactitude. Un protocole préconfiguré permet d’épargner du temps en calculant automatiquement les résultats.
CALCULER LES RÉSULTATS
La quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon est calculée, et différents échantillons (par exemple, les cellules soumises à différentes conditions de traitement) peuvent être comparés.
Automatisation des séquences de travail
Nous proposons des cellules de travail évolutives prêtes à être automatisées, allant du niveau d’entrée de gamme au niveau avancé, qui peuvent être personnalisées pour répondre à vos besoins de recherche spécifiques
Découvrez les cellules de travail
https://vids.moleculardevices.com/watch/EsYUk5mwGne1KefZnMGZjq
Cellules de travail ELISA prêtes à être automatisées
L’automatisation d’un flux de travail ELISA peut prendre les étapes fastidieuses de la préparation des échantillons, du pipetage des réactifs et du lavage des microplaques et peut améliorer la reproductibilité de vos résultats. Un flux de travail ELISA automatisé peut être associé à un logiciel de contrôle et à des composants, créant ainsi des cellules de travail haut débit évolutives.