Qu’est-ce qu’un dosage ELISA ?
Le test ELISA (dosage d’immunoabsorption enzymatique) est une méthode utilisée pour détecter de façon quantitative un antigène dans un échantillon. Un antigène est une toxine ou une autre substance étrangère, par exemple, un virus de la grippe ou un contaminant environnemental, qui provoque une réaction de défense par le système immunitaire des vertébrés. La plage des antigènes potentiels est vaste. Par conséquent, les dosages ELISA sont utilisés dans de nombreux domaines de recherche et essais pour détecter et quantifier les antigènes dans un grand nombre d’échantillons. Les lysats cellulaires, les prélèvements de sang, les aliments, et bien plus encore, peuvent être analysés avec des dosages ELISA pour rechercher des substances spécifiques d’intérêt.
Il existe quatre principaux types de test ELISA : direct, indirect, compétitif et sandwich. Chaque type est décrit ci-dessous avec un schéma illustrant la façon selon laquelle les analytes et les anticorps sont liés et utilisés.
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Dosage ELISA direct
Dans un dosage ELISA direct, l’antigène est lié au fond du puits de la microplaque, puis il est lié par un anticorps qui lui est spécifique et également conjugué à une enzyme ou à une autre molécule qui permet la détection.
ELISA indirect
Dans un test ELISA indirect, l’antigène est lié au fond du puits de la microplaque, puis un anticorps spécifique à l’antigène est ajouté. Un anticorps secondaire, conjugué à une enzyme ou à une autre molécule de détection est ensuite lié au premier anticorps.
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ELISA compétitif
Dans un ELISA compétitif, un antigène de référence est lié au fond des puits de la microplaque. L’échantillon plus l'anticorps sont ajoutés aux puits, et si un antigène est présent dans l’échantillon, il est en compétition avec l’antigène de référence pour se lier à l’anticorps. La substance non liée est éliminée. Plus la quantité d’antigène est importante dans l’échantillon, plus la quantité d’anticorps liée par l’antigène de référence au fond des puits est faible, et plus le signal est faible.
Dosage ELISA de type sandwich
Pour le dosage ELISA de type sandwich, deux anticorps spécifiques à deux épitopes différents sur l’antigène cible sont utilisés. L’anticorps de capture est lié au fond du puits de la microplaque et se fixe à un épitope de l’antigène. L’anticorps de détection se lie à l’antigène à un épitope différent et est conjugué à une enzyme qui permet la détection. (Si l’anticorps de détection n’est pas conjugué, alors un anticorps de détection conjugué à une enzyme secondaire est requis).
Étapes pour exécuter un dosage ELISA de type sandwich
La plupart des tests ELISA de type sandwich sont exécutés dans des microplaques, le fond des puits des microplaques servant de surface solide à laquelle se fixent les anticorps et d’autres réactifs. Un laveur de microplaques est utilisé pour éliminer les substances non spécifiques se trouvant dans les puits, et un lecteur de microplaques ELISA à absorbance détecte la variation de couleur produite lorsque l’antigène cible est présent. Un logiciel pour lecteurs de microplaques est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats.
L’illustration ci-dessous montre un flux de travail pour un test ELISA de type sandwich courant :
Étape 1 : Capturer l’anticorps fixé aux puits de la plaque ELISA.
Étape 2: Ajouter l’échantillon dans le puits : l’antigène présent dans l’échantillon se fixe à l’anticorps de capture.
Étape 3: Laver la microplaque : le matériau non lié est éliminé, ne laissant que l’antigène d’intérêt.
Étape 4: Ajouter l’anticorps de détection : l’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt.
Étape 5: Laver la microplaque : les anticorps non liés sont éliminés, ne laissant que les anticorps spécifiques à la cible d’intérêt.
Étape 6: Ajouter le substrat : le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur.
Étape 7: Lire la plaque : le lecteur de microplaques détecte la réaction colorée et indique les valeurs de densité optique (DO).
Étape 8: Calculer les résultats : la quantité d’antigène est calculée et analysée dans chaque échantillon.
Tests ELISA et applications
Le dosage d’immunoabsorption enzymatique est une technique d’analyse couramment utilisée dans de nombreux laboratoires de recherche et de biotech. Voici ci-dessous un ensemble de notes d’application, de recherches et de technologies concernant des dosages et des applications ELISA significatifs.
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Dosage ELISA par chimioluminescence pour les FCEV
Les facteurs de croissance endothéliale vasculaire (FCEV) constituent une famille de polypeptides sécrétés impliqués dans la formation des vaisseaux sanguins chez les mammifères et l’évolution de certaines affections impliquant une croissance anormale des vaisseaux sanguins.
Lire la note d'application : VEGF ELISA chimiluminescent avec le luminomètre de microplaques SpectraMax L
Dosage ELISA par chimioluminescence pour les FCEV
Les facteurs de croissance endothéliale vasculaire (FCEV) constituent une famille de polypeptides sécrétés impliqués dans la formation des vaisseaux sanguins chez les mammifères et l’évolution de certaines affections impliquant une croissance anormale des vaisseaux sanguins.
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Identification d’aflatoxine dans le cannabis
Ici, nous démontrons comment le kit AgraQuant Total Aflatoxin 4/40 ELISA peut être utilisé avec le lecteur de microplaques SpectraMax® ABS Plus et le lecteur de microplaques multimode SpectraMax® iD5 afin de déterminer les taux d’aflatoxines B1, B2, G1 et G2 dans l’un des produits du cannabis les plus courants, à savoir la fleur.
Lire la note d'application : Déterminez la concentration totale d’aflatoxine dans le cannabis en utilisant une méthode ELISA
Identification d’aflatoxine dans le cannabis
Ici, nous démontrons comment le kit AgraQuant Total Aflatoxin 4/40 ELISA peut être utilisé avec le lecteur de microplaques SpectraMax® ABS Plus et le lecteur de microplaques multimode SpectraMax® iD5 afin de déterminer les taux d’aflatoxines B1, B2, G1 et G2 dans l’un des produits du cannabis les plus courants, à savoir la fleur.
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Résultats plus rapides avec les kits ELISA
Un protocole ELISA typique est fastidieux et implique multiples étapes d’incubation et de lavage. Les kits ELISA CatchPoint SimpleStep permettent d’exécuter le flux de travail ELISA en 90 minutes, une réduction de deux tiers du temps nécessaire pour l’exécution d’un test ELISA classique.
Lire la note d'application : Résultats ELISA plus rapides avec les kits de test ELISA CatchPoint SimpleStep
Résultats plus rapides avec les kits ELISA
Un protocole ELISA typique est fastidieux et implique multiples étapes d’incubation et de lavage. Les kits ELISA CatchPoint SimpleStep permettent d’exécuter le flux de travail ELISA en 90 minutes, une réduction de deux tiers du temps nécessaire pour l’exécution d’un test ELISA classique.
Lire la note d'application : Résultats ELISA plus rapides avec les kits de test ELISA CatchPoint SimpleStep
Quantification du gluten dans la bière
Les taux de gliadine ont été testés dans six bières du commerce afin de déterminer les taux de gluten avec le dosage ELISA compétitif RIDASCREEN Gliadin.
Lire la note d'application : Quantification du gluten dans la bière avec une méthode ELISA approuvée par ASBC
Quantification du gluten dans la bière
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Détection de la mélamine avec le kit ELISA
Le dosage d’immunoabsorption enzymatique (ELISA) Melamine d’Abraxis est un dosage immunologique pour le criblage quantitatif de la mélamine se basant sur la reconnaissance de la mélamine par les anticorps.
Lire la note d'application : Détection haut débit de mélamine avec le kit Melamine ELISA d'Abraxis et les lecteurs d'absorbance Molecular Devices
Détection de la mélamine avec le kit ELISA
Le dosage d’immunoabsorption enzymatique (ELISA) Melamine d’Abraxis est un dosage immunologique pour le criblage quantitatif de la mélamine se basant sur la reconnaissance de la mélamine par les anticorps.
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Quantification des protéines
Une comparaison de la performance est effectuée entre le lecteur de microplaques EMax Plus et le lecteur en point final EMax utilisant un dosage ELISA de type sandwich afin de quantifier les taux de la cytokine Interleukine-22 (IL-22 de souris/rat).
Lire la note d'application : Quantification des protéines avec le lecteur de microplaques EMax Plus
Quantification des protéines
Une comparaison de la performance est effectuée entre le lecteur de microplaques EMax Plus et le lecteur en point final EMax utilisant un dosage ELISA de type sandwich afin de quantifier les taux de la cytokine Interleukine-22 (IL-22 de souris/rat).
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Quantification de l’interleukine-8
Apprenez à exécuter le dosage ELISA Human IL-8 SimpleStep sur le lecteur de microplaques SpectraMax® ABS Plus grâce à un protocole pratique préconfiguré.
Lire la note d'application : Quantifier les concentrations d’interleukine-8 sur le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus avec le kit ELISA SimpleStep
Quantification de l’interleukine-8
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Flux de travail d’un protocole ELISA
Le flux de travail d’un protocole ELISA de type sandwich habituel comporte plusieurs étapes d’ajout de réactif, d’incubation et de lavage. Ici, nous mettons en avant chaque étape et les instruments et outils nécessaires pour exécuter le test ELISA, notamment un laveur de microplaques, un lecteur de microplaques ELISA à absorbance et un logiciel.
L’ANTICORPS DE CAPTURE SE FIXE AUX PUITS
Tout d’abord, l’anticorps de capture se lie au fond du puits de la microplaque.
Microplaque ELISA
La plupart des dosages ELISA sont exécutés dans des microplaques à 96 ou 384 puits, une plaque de 96 puits étant la plus courante et parfois appelée plaque ELISA. Le fond des puits de la microplaque sert de surface solide à laquelle les anticorps et d'autres réactifs se fixent. Des microplaques sont généralement incluses dans un kit ELISA.
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En savoir plus
AJOUTER UN ÉCHANTILLON
L’échantillon est ajouté au puits, et l’antigène présent dans l’échantillon se lie à l’anticorps de capture.
LAVER LA MICROPLAQUE
La substance non liée est éliminée par lavage, ne laissant que l’antigène d’intérêt et minimisant le risque de signal de bruit de fond élevé.
Lecteur et laveur de microplaques ELISA
Solution complète pour votre flux de travail ELISA utilisant le lecteur de microplaques EMax plus avec les données du SoftMax Pro et un logiciel d’acquisition et le laveur de microplaques MultiWash+.
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AJOUTER UN ANTICORPS DE DÉTECTION
L’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt, ce qui permet de détecter l’antigène.
LAVER LA MICROPLAQUE
Les anticorps non liés sont éliminés par lavage, ne laissant que les anticorps spécifiques de la cible d’intérêt et minimisant à nouveau le risque de signal de bruit de fond.
Laveur de microplaques ELISA
Laveur de microplaques AquaMax : L’aspiration et la distribution des 96 et 384 puits se font simultanément dans tous les puits, ce qui permet d’avoir des dosages de grande précision et un traitement plus rapide des microplaques sans indexation mécanique des plaques ni traitement en quadrant.
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AJOUTER UN SUBSTRAT
Le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur, avec une intensité proportionnelle à la quantité d’antigène présente.
Selon l’enzyme et le substrat utilisés, la lecture peut également être fluorescente ou luminescente.
LIRE LA MICROPLAQUE
Le lecteur de microplaques détecte le produit réactionnel coloré et indique les valeurs de densité optique (D.O.) qui reflètent la quantité de lumière absorbée par les contenus de chaque puits.
Lecteur de microplaques ELISA
Un lecteur de plaques ELISA, comme le lecteur de plaques ELISA en absorbance SpectraMax ABS Plus, détecte le changement de couleur produit lorsque l’antigène cible est présent. Cela est possible en mesurant la quantité de lumière ayant traversé les puits de la microplaque qui est absorbée par la matière se trouvant dans les puits. Plus la quantité d’antigène présente est importante, plus la valeur d’absorbance est élevée.
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Logiciel pour lecteurs de plaques ELISA
Un logiciel pour lecteurs de plaques ELISA, comme notre logiciel d’analyse de données SoftMax Pro, est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats à partir des valeurs d’absorbance fournies par le lecteur de microplaques.
Une courbe d’étalonnage est exécutée afin que la quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon puisse être calculée avec exactitude. Un protocole préconfiguré permet d’épargner du temps en calculant automatiquement les résultats.
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CALCULER LES RÉSULTATS
La quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon est calculée, et différents échantillons (par exemple, les cellules soumises à différentes conditions de traitement) peuvent être comparés.
Ressources sur les tests ELISA
Note d'application
Quantification du gluten dans la bière avec une méthode ELISA approuvée par ASBC
Quantifying gluten in beer using an ASBC-approved ELISA method
En raison de l’augmentation récente des cas de maladie cœliaque, la surveillance du taux de gluten dans les aliments et les boissons est de plus en plus importante car de nombreuses personnes souhaitent éviter le gluten.
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Note d'application
Résultats ELISA plus rapides avec les kits de test ELISA CatchPoint SimpleStep
Faster ELISA results with CatchPoint SimpleStep ELISA kits
Les kits ELISA CatchPoint SimpleStep permettent d’exécuter le flux de travail ELISA en 90 minutes, une réduction de deux tiers du temps nécessaire pour l’exécution d’un test ELISA classique.
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Note d'application
Quantifier les concentrations d’interleukine-8 sur le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus avec le kit ELISA SimpleStep
Quantitate interleukin-8 concentrations on the SpectraMax ABS Plus Microplate Reader with the SimpleStep ELISA kit
Apprenez à exécuter le dosage ELISA Human IL-8 SimpleStep sur le lecteur de microplaques SpectraMax® ABS Plus grâce à un protocole pratique préconfiguré.
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Note d'application
ELISA chimioluminescent VEGF avec le luminomètre de microplaques SpectraMax L
Chemiluminescent VEGF ELISA Using the SpectraMax L Microplate Luminometer
Les facteurs de croissance endothéliale vasculaire (FCEV) constituent une famille de polypeptides sécrétés impliqués dans la formation des vaisseaux sanguins chez les mammifères et l’évolution de certaines affections impliquant…
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Note d'application
Quantification des protéines avec le lecteur de microplaques EMax Plus
Protein quantitation with the EMax Plus Microplate Reader
Les lecteurs en points finaux abondent dans les laboratoires, car l’absorbance est devenue la détection de choix pour de nombreuses applications. Des exemples incluent les dosages ELISA pour la quantification des cytokines et des…protéines
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Note d'application
Détection haut débit de mélamine avec le kit Melamine ELISA d'Abraxis et les lecteurs d'absorbance de Molecular Devices
High-throughput melamine detection with Abraxis Melamine ELISA Kit and Molecular Devices Absorbance readers
La mélamine à base organique est utilisée pour fabriquer un certain nombre de produits, notamment les plastiques, les agents ignifuges, les pigments et les engrais. La pratique consistant à ajouter de la mélamine à l’alimentation animale et aux aliments pour…
Vidéos et webinaires
Lecteurs de microplaques en absorbance SpectraMax ABS et ABS Plus
Logiciel SoftMax Pro 7
Laveur de microplaques AquaMax
Flux de travail ELISA utilisant le lecteur de microplaques EMax plus et le laveur de microplaques MultiWash+