Qu’est-ce qu’un dosage ELISA ?
Le test ELISA (dosage d’immunoabsorption enzymatique) est une méthode utilisée pour détecter de façon quantitative un antigène dans un échantillon. Un antigène est une toxine ou une autre substance étrangère, par exemple, un virus de la grippe ou un contaminant environnemental, qui provoque une réaction de défense par le système immunitaire des vertébrés. La plage des antigènes potentiels est vaste. Par conséquent, les dosages ELISA sont utilisés dans de nombreux domaines de recherche et essais pour détecter et quantifier les antigènes dans un grand nombre d’échantillons. Les lysats cellulaires, les prélèvements de sang, les aliments, et bien plus encore, peuvent être analysés avec des dosages ELISA pour rechercher des substances spécifiques d’intérêt.
Il existe quatre principaux types de test ELISA : direct, indirect, compétitif et sandwich. Chaque type est décrit ci-dessous avec un schéma illustrant la façon selon laquelle les analytes et les anticorps sont liés et utilisés.
Étapes pour exécuter un dosage ELISA de type sandwich
La plupart des tests ELISA de type sandwich sont exécutés dans des microplaques, le fond des puits des microplaques servant de surface solide à laquelle se fixent les anticorps et d’autres réactifs. Un laveur de microplaques est utilisé pour éliminer les substances non spécifiques se trouvant dans les puits, et un lecteur de microplaques ELISA à absorbance détecte la variation de couleur produite lorsque l’antigène cible est présent. Un logiciel pour lecteurs de microplaques est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats.
L’illustration ci-dessous montre un flux de travail pour un test ELISA de type sandwich courant :
Étape 1 : Capturer l’anticorps fixé aux puits de la plaque ELISA.
Étape 2: Ajouter l’échantillon dans le puits : l’antigène présent dans l’échantillon se fixe à l’anticorps de capture.
Étape 3: Laver la microplaque : le matériau non lié est éliminé, ne laissant que l’antigène d’intérêt.
Étape 4: Ajouter l’anticorps de détection : l’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt.
Étape 5: Laver la microplaque : les anticorps non liés sont éliminés, ne laissant que les anticorps spécifiques à la cible d’intérêt.
Étape 6: Ajouter le substrat : le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur.
Étape 7: Lire la plaque : le lecteur de microplaques détecte la réaction colorée et indique les valeurs de densité optique (DO).
Étape 8: Calculer les résultats : la quantité d’antigène est calculée et analysée dans chaque échantillon.
Bien qu’un test ELISA soit facile à mettre en place, la procédure de test est fastidieuse et laborieuse. L’automatisation de laboratoire pour des flux de travail sur plaque haut débit peut permettre de réduire le temps d’attente, d’augmenter le débit, l’efficacité et le rendement de la procédure de test, ainsi que sa reproductibilité.
Tests ELISA et applications
Le dosage d’immunoabsorption enzymatique est une technique d’analyse couramment utilisée dans de nombreux laboratoires de recherche et de biotech. Voici ci-dessous un ensemble de notes d’application, de recherches et de technologies concernant des dosages et des applications ELISA significatifs.
Dernières ressources
Flux de travail d’un protocole ELISA
Le flux de travail d’un protocole ELISA de type sandwich habituel comporte plusieurs étapes d’ajout de réactif, d’incubation et de lavage. Ici, nous mettons en avant chaque étape et les instruments et outils nécessaires pour exécuter le test ELISA, notamment un laveur de microplaques, un lecteur de microplaques ELISA à absorbance et un logiciel.