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Dosage d’immunoabsorption enzymatique (ELISA)

Qu’est-ce qu’un dosage ELISA ?

Le test ELISA (dosage d’immunoabsorption enzymatique) est une méthode utilisée pour détecter de façon quantitative un antigène dans un échantillon. Un antigène est une toxine ou une autre substance étrangère, par exemple, un virus de la grippe ou un contaminant environnemental, qui provoque une réaction de défense par le système immunitaire des vertébrés. La plage des antigènes potentiels est vaste. Par conséquent, les dosages ELISA sont utilisés dans de nombreux domaines de recherche et essais pour détecter et quantifier les antigènes dans un grand nombre d’échantillons. Les lysats cellulaires, les prélèvements de sang, les aliments, et bien plus encore, peuvent être analysés avec des dosages ELISA pour rechercher des substances spécifiques d’intérêt.

Il existe quatre principaux types de test ELISA : direct, indirect, compétitif et sandwich. Chaque type est décrit ci-dessous avec un schéma illustrant la façon selon laquelle les analytes et les anticorps sont liés et utilisés.

  • Dosage ELISA direct

    Dosage ELISA direct

    Dans un dosage ELISA direct, l’antigène est lié au fond du puits de la microplaque, puis il est lié par un anticorps qui lui est spécifique et également conjugué à une enzyme ou à une autre molécule qui permet la détection.

    ELISA indirect

    ELISA indirect

    Dans un test ELISA indirect, l’antigène est lié au fond du puits de la microplaque, puis un anticorps spécifique à l’antigène est ajouté. Un anticorps secondaire, conjugué à une enzyme ou à une autre molécule de détection est ensuite lié au premier anticorps.

  • ELISA compétitif

    Dans un ELISA compétitif, un antigène de référence est lié au fond des puits de la microplaque. L’échantillon plus l'anticorps sont ajoutés aux puits, et si un antigène est présent dans l’échantillon, il est en compétition avec l’antigène de référence pour se lier à l’anticorps. La substance non liée est éliminée. Plus la quantité d’antigène est importante dans l’échantillon, plus la quantité d’anticorps liée par l’antigène de référence au fond des puits est faible, et plus le signal est faible.

    Dosage ELISA de type sandwich

    Dosage ELISA de type sandwich

    Pour le dosage ELISA de type sandwich, deux anticorps spécifiques à deux épitopes différents sur l’antigène cible sont utilisés. L’anticorps de capture est lié au fond du puits de la microplaque et se fixe à un épitope de l’antigène. L’anticorps de détection se lie à l’antigène à un épitope différent et est conjugué à une enzyme qui permet la détection. (Si l’anticorps de détection n’est pas conjugué, alors un anticorps de détection conjugué à une enzyme secondaire est requis).

Étapes pour exécuter un dosage ELISA de type sandwich

La plupart des tests ELISA de type sandwich sont exécutés dans des microplaques, le fond des puits des microplaques servant de surface solide à laquelle se fixent les anticorps et d’autres réactifs. Un laveur de microplaques est utilisé pour éliminer les substances non spécifiques se trouvant dans les puits, et un lecteur de microplaques ELISA à absorbance détecte la variation de couleur produite lorsque l’antigène cible est présent. Un logiciel pour lecteurs de microplaques est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats.

L’illustration ci-dessous montre un flux de travail pour un test ELISA de type sandwich courant :

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Étape 1 : Capturer l’anticorps fixé aux puits de la plaque ELISA.

Étape 2: Ajouter l’échantillon dans le puits : l’antigène présent dans l’échantillon se fixe à l’anticorps de capture.

Étape 3: Laver la microplaque : le matériau non lié est éliminé, ne laissant que l’antigène d’intérêt.

Étape 4: Ajouter l’anticorps de détection : l’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt.

Étape 5: Laver la microplaque : les anticorps non liés sont éliminés, ne laissant que les anticorps spécifiques à la cible d’intérêt.

Étape 6: Ajouter le substrat : le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur.

Étape 7: Lire la plaque : le lecteur de microplaques détecte la réaction colorée et indique les valeurs de densité optique (DO).

Étape 8: Calculer les résultats : la quantité d’antigène est calculée et analysée dans chaque échantillon.

Voir un protocole ELISA

 

Tests ELISA et applications

 

Le dosage d’immunoabsorption enzymatique est une technique d’analyse couramment utilisée dans de nombreux laboratoires de recherche et de biotech. Voici ci-dessous un ensemble de notes d’application, de recherches et de technologies concernant des dosages et des applications ELISA significatifs.

 

Flux de travail d’un protocole ELISA

Le flux de travail d’un protocole ELISA de type sandwich habituel comporte plusieurs étapes d’ajout de réactif, d’incubation et de lavage. Ici, nous mettons en avant chaque étape et les instruments et outils nécessaires pour exécuter le test ELISA, notamment un laveur de microplaques, un lecteur de microplaques ELISA à absorbance et un logiciel.

 

Flux de travail : Protocole de dosage ELISA
 
L’anticorps se lie au puits

L’ANTICORPS DE CAPTURE SE FIXE AUX PUITS

Tout d’abord, l’anticorps de capture se lie au fond du puits de la microplaque.

Puits de la microplaque

Microplaque ELISA

La plupart des dosages ELISA sont exécutés dans des microplaques à 96 ou 384 puits, une plaque de 96 puits étant la plus courante et parfois appelée plaque ELISA. Le fond des puits de la microplaque sert de surface solide à laquelle les anticorps et d'autres réactifs se fixent. Des microplaques sont généralement incluses dans un kit ELISA.

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spectres
spectres mobile
ajouter un échantillon
ajouter un échantillon mobile

AJOUTER UN ÉCHANTILLON

L’échantillon est ajouté au puits, et l’antigène présent dans l’échantillon se lie à l’anticorps de capture.

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laver la microplaque
laver la microplaque mobile

LAVER LA MICROPLAQUE

La substance non liée est éliminée par lavage, ne laissant que l’antigène d’intérêt et minimisant le risque de signal de bruit de fond élevé.

Lecteur et laveur de microplaques ELISA

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Solution complète pour votre flux de travail ELISA utilisant le lecteur de microplaques EMax plus avec les données du SoftMax Pro et un logiciel d’acquisition et le laveur de microplaques MultiWash+.

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ajouter un anticorps de détection
ajouter un anticorps de détection mobile

AJOUTER UN ANTICORPS DE DÉTECTION

L’anticorps de détection conjugué à une enzyme se lie à un second site sur l’antigène d’intérêt, ce qui permet de détecter l’antigène.

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laver les microplaques
laver les microplaques mobile

LAVER LA MICROPLAQUE

Les anticorps non liés sont éliminés par lavage, ne laissant que les anticorps spécifiques de la cible d’intérêt et minimisant à nouveau le risque de signal de bruit de fond.

Laveur de microplaques AquaMax

Laveur de microplaques ELISA

Laveur de microplaques AquaMax : L’aspiration et la distribution des 96 et 384 puits se font simultanément dans tous les puits, ce qui permet d’avoir des dosages de grande précision et un traitement plus rapide des microplaques sans indexation mécanique des plaques ni traitement en quadrant.

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ajouter un substrat
ajouter un substrat mobile

AJOUTER UN SUBSTRAT

Le substrat est converti par l’enzyme sur l’anticorps de détection, entraînant un changement de couleur, avec une intensité proportionnelle à la quantité d’antigène présente.

Selon l’enzyme et le substrat utilisés, la lecture peut également être fluorescente ou luminescente.

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lire la microplaque
lire la microplaque mobile

LIRE LA MICROPLAQUE

Le lecteur de microplaques détecte le produit réactionnel coloré et indique les valeurs de densité optique (D.O.) qui reflètent la quantité de lumière absorbée par les contenus de chaque puits.

Principe du lecteur de plaques ELISA

Lecteur de microplaques ELISA

Un lecteur de plaques ELISA, comme le lecteur de plaques ELISA en absorbance SpectraMax ABS Plus, détecte le changement de couleur produit lorsque l’antigène cible est présent. Cela est possible en mesurant la quantité de lumière ayant traversé les puits de la microplaque qui est absorbée par la matière se trouvant dans les puits. Plus la quantité d’antigène présente est importante, plus la valeur d’absorbance est élevée.

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Logiciel pour lecteurs de plaques ELISA

Logiciel pour lecteurs de plaques ELISA

Un logiciel pour lecteurs de plaques ELISA, comme notre logiciel d’analyse de données SoftMax Pro, est utilisé pour tracer les courbes d’étalonnage et calculer les résultats à partir des valeurs d’absorbance fournies par le lecteur de microplaques.

Une courbe d’étalonnage est exécutée afin que la quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon puisse être calculée avec exactitude. Un protocole préconfiguré permet d’épargner du temps en calculant automatiquement les résultats.

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calculer le résultat
calculer le résultat mobile

CALCULER LES RÉSULTATS

La quantité d’antigène contenue dans chaque échantillon est calculée, et différents échantillons (par exemple, les cellules soumises à différentes conditions de traitement) peuvent être comparés.

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Ressources sur les tests ELISA

Vidéos et webinaires

Lecteurs de microplaques en absorbance SpectraMax ABS et ABS Plus

Lecteurs de microplaques en absorbance SpectraMax ABS et ABS Plus

Logiciel SoftMax Pro 7

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Laveur de microplaques AquaMax

Laveur de microplaques AquaMax

Flux de travail ELISA utilisant le lecteur de microplaques EMax plus

Flux de travail ELISA utilisant le lecteur de microplaques EMax plus et le laveur de microplaques MultiWash+

Produits et services connexes