Le défi
L'objectif de ces études est d'identifier des mécanismes qui sont exploitables en cadre thérapeutique et donc applicables à la prévention de la perte de mémoire. Le Dr Krishnan étudie l’expression différentielle de la phospholipase D (PLD) et les effets des isoformes en utilisant une approche multidisciplinaire fondée sur des études d’électrophysiologie, de signalisation et de comportement.
La solution
Ses études électrophysiologiques comprennent l'utilisation de deux plates-formes patch-clamp, chacune avec un amplificateur à microélectrodes MultiClamp 700B et un numériseur Digidata. Une plate-forme est utilisée pour les enregistrements de patch de coupe de cerveau et les enregistrements de terrain dans des coupes de cerveau de rongeurs, alors que l'autre est conçue pour les enregistrements de patch cellulaire. Les deux plates-formes patch-clamp bénéficient d'enregistrements doubles pour évaluer les mécanismes de signalisation sous-jacents à la mémoire et aux souvenirs. Ces études seront déterminantes pour pouvoir cartographier les circuits cérébraux affectés tout en enregistrant simultanément les modifications au niveau de chaque neurone.
- La maladie d’Alzheimer (MA), la maladie neurodégénérative associée au vieillissement la plus fréquente et la plus sévère
- Actuellement, il n’existe aucun remède, il est donc nécessaire et urgent d’identifier des cibles thérapeutiques innovantes pour la prévention et le traitement
Produits utilisés
L'Axon™ Digidata® 1550B Low Noise Data Acquisition System peut être équipé d'un nombre maximum de quatre canaux HumSilencer™, ce qui vous permet d'enregistrer plusieurs cellules à la fois et d'étudier ainsi des réseaux cellulaires sans bruit de fréquence de ligne à 50/60 Hz.
L'amplificateur de microélectrode MultiClamp™ 700B est un amplificateur de microélectrode polyvalent, contrôlé par ordinateur conçu pour un enregistrement patch-clamp ou voltage-clamp (rétroaction résistive, quatre gammes) ou current-clamp haute vitesse (suiveur de tension, trois gammes) dans la même tête. De nombreuses fonctions automatisées et un conditionnement de signal efficace. Idéal pour un grand nombre d'applications, dont les enregistrements current-clamp haute vitesse (électrode pointue ou potentiels de champ), patch-clamp (cellules entières, macro-patch ou patch coupé), de voltamétrie/ampérométrie, de mesures sélectives d'ions et de bicouches.
Les résultats
Le Dr Krishnan utilise deux amplificateurs de micro-électrode MultiClamp 700B, le système Axon Digidata 1550A avec HumSilencer, le système Axon Digidata 1332A et le logiciel d’acquisition et d’analyse des données d’électrophysiologie Axon pCLAMP 10 pour :
- Découvrir les rythmes circadiens périphériques de l’odorat dans Drosophila melanogaster, la première preuve de changement fonctionnel dans l’oscillateur périphérique gouvernant les rythmes circadiens.
- Analyser la fonction synaptique dans l’amygdale, qui contrôle l’expression à long terme des mémoires appétitives et aversives.
- Évaluer comment la perturbation de la fonction synaptique dans l’hippocampe est à la base d’événements précoces dans les états neurodégénératifs entraînant une perte de mémoire pathologique.
Références
Visualiser notre webinaire avec le Dr Krishnan : Utilisation des études électrophysiologiques pour accélérer l’étude mécanique sur la réception et la transmission
Résumé de ses recherches lors de la rencontre Neuroscience 2016