SUN Bioscience utilise le système d’imagerie à haut contenu ImageXpress® Micro Confocal pour imager la plateforme d’organoïdes haut débit
MEMBRES DE L’ÉQUIPE
Maria Clapés Cabrer
SUN Bioscience
PRODUITS UTILISÉS
ImageXpress Micro Confocal
Logiciel d’analyse d’images IN Carta
Le défi
Le recueil d’images et de données haut débit précises et fiables constitue l’une des plus grandes difficultés auxquelles sont confrontés les chercheurs utilisant des micro-tissus complexes en 3 dimensions (3D). Les innovations de SUN Bioscience dans le domaine des organoïdes et de la culture cellulaire 3D visent à standardiser la culture des organoïdes grâce à leur plateforme de micropuits haut débit exclusive, Gri3D®.
Les plaques à micropuits Gri3D permettent la génération de plusieurs organoïdes de tailles similaires dans le même plan focal, ce qui nécessite moins de temps d’imagerie et moins d’espace de stockage des images. Toutefois, pour en tirer pleinement parti, un système d’imagerie 3D haut débit et haut contenu est nécessaire pour vous permettre de passer à des tests d’organoïdes à haut débit. Une telle solution est importante non seulement pour les clients de SUN Bioscience, mais aussi pour l’entreprise elle-même, lorsqu’elle développe ses plaques, génère des études de validation de principe et démontre les possibilités offertes par ses solutions.
La solution
SUN Bioscience a découvert que le système d’imagerie à haut contenu ImageXpress Micro Confocal de MOLECULAR DEVICES s’intègre bien à son Gri3D pour constituer une plateforme qui permet l’imagerie haut contenu et haut débit d’organoïdes, optimise le recueil de points de données et réduit la durée d’imagerie. L’ImageXpress Micro Confocal accélère considérablement le processus d’imagerie, ce qui permet une imagerie in situ en fond clair et en fluorescence à divers grossissements (faible à 4x, moyen à 10-20x et élevé à 40x) directement sur la plaque. Non seulement les tests sont accélérés, mais l’imagerie et les analyses ultérieures sont plus rapides et plus efficaces. L’imagerie en fond clair au fil du temps fournit des informations sur la dynamique du développement de l’organoïde. SUN bioscience utilise cette approche d’imagerie sans marquage (label-free) couplée au logiciel d’analyse d’images IN CARTA® basé sur l’IA pour analyser et caractériser chaque organoïde.
Produits utilisés
Le système ImageXpress Micro Confocal est une solution d’imagerie haut contenu qui permet la transition de l’imagerie confocale à l’imagerie à large champ des cellules vivantes et fixées. Il peut capturer des images de grande qualité d’organismes entiers, de tissus épais, de modèles 2D et 3D et d’événements cellulaires ou intracellulaires. L’imagerie confocale à disque rotatif et la caméra sCMOS permettent une imagerie des événements rapides et rares comme le battement des cellules cardiaques et la différenciation des cellules souches. Grâce au logiciel MetaXpress et aux options flexibles comme les objectifs à immersion dans l’eau à choisir, le système assure la prise en charge de nombreuses applications d’imagerie confocale, allant du développement de tests 3D au criblage.
Les résultats
Jusqu’à présent, SUN Bioscience a effectué plusieurs tests sur le système ImageXpress, notamment la surveillance d’organoïdes individuels lors de criblages de validation de principe en fond clair sur des organoïdes gastro-intestinaux et des tumoroïdes de cancer du pancréas, ainsi que la modélisation de maladies inflammatoires de l’intestin, en particulier les effets d’un cocktail de cytokines sur la viabilité et le cytosquelette d’organoïdes rectaux humains.
Réponse d’organoïdes de cancer du pancréas dérivés de patients exposés à des composés anticancéreux pendant 72 heures. A. Images TL avant (0 h) et après (72 h) l’exposition et images de projection maximale d’organoïdes après un test vivant/mort à 72 h. Vert : calcéine AM, vivant ; rouge : EthD-1, mort. B. Rapport d’intensité entre l’homodimère-1 d’éthidium (EthD-1) et la calcéine AM. C. Facteur de non-normalité des niveaux de gris (GLNN) sur les images TL. Les barres d’erreur indiquent l’écart-type. Chaque point représente un organoïde. Comparaisons multiples de Dunnett après ANOVA à un facteur contrôlé, **P < 0,01, P**** < 0,0001, ns : non significatif. Taille des micropuits : 500 µm
Images confocales à fort grossissement d’organoïdes rectaux humains exposés à des cytokines pro-inflammatoires. Images à plan unique 4oX, actine F(magenta) et DAPI (bleu). Les flèches indiquent les régions d’intérêt où le signal de l’actine F montre une structure définie dans le contrôle et en présence d’infliximab. La délocalisation de l’actine F est mise en évidence en présence du cocktail inflammatoire.