MISE EN CULTURE DE SPHÉROÏDES
La cellule 3D peut être mise en culture directement dans une plaque à fond arrondi et fixation ultra-faible afin de développer la forme sphérique habituelle d’un sphéroïde. Les cellules peuvent également être cultivées dans d’autres appareils de laboratoire comme une boîte de Petri, un flacon ou toute autre microplaque avant d’être transférées dans une microplaque d’imagerie.
Plaques à 96 ou 384 puits
La plupart des cultures cellulaires 3D pour le criblage haut débit et haut contenu sont exécutées avec des microplaques à 96 ou 384 puits. Les microplaques à fond arrondi/en forme de U et à fixation ultra-faible permettent à la forme sphérique de former des sphéroïdes. Sinon, des sphéroïdes peuvent également être mis en culture dans une microplaque à fond plat en utilisant des hydrogels pour simuler des matrices extra-cellulaires (MEC). Les protocoles optimisés de culture cellulaire de sphéroïdes pour le système d’imagerie à haut contenu ImageXpress® Micro Confocal peuvent utiliser des plaques en forme de U et à fixation ultra-faible de 96 ou 384 puits avec un procédure de marquage en une étape permettant de réduire la durée du test et de minimiser la variabilité.
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TRAITEMENT AVEC DES COMPOSÉS
Après la formation de sphéroïdes, des composés sont ajoutés dans les puits, puis incubés pendant un ou plusieurs jours, selon le mécanisme étudié. En général, les durées plus courtes sont utilisées pour étudier l’apoptose et les durées plus longues pour les études de cytotoxicité à paramètres multiples. Pour les traitements médicamenteux nécessitant une durée plus longue, les composés sont régulièrement renouvelés pendant l’incubation. La concentration des composés et la durée d’incubation dépendent du protocole souhaité.
COLORATION POUR LES MARQUEURS
Une fois le traitement avec des composés terminé, des colorants sont directement ajoutés au milieu. Il est possible d’utiliser des colorants ne nécessitant aucun lavage afin de ne pas perturber les sphéroïdes, mais, si nécessaire, ces derniers peuvent être minutieusement lavés même lorsque l’automatisation est utilisée.
Kits d'essai
Kits de test robustes et faciles à utiliser pour les recherches en sciences de la vie, la découverte et le développement de médicaments et les tests biologiques. Nos kits de test sont optimisés pour une utilisation sur nos instruments. Criblez davantage de composés plus tôt dans le processus de découverte de médicaments et permettez la caractérisation d’un profil complet concentration-réponse des composés analysés pour la viabilité cellulaire, la prolifération cellulaire, l’axiogenèse et bien plus encore.
Système d'imagerie à haut contenu
Le système ImageXpress Micro Confocal est une solution d’imagerie confocale unique permettant de générer les images de plus d’un million de puits par semaine Le logiciel MetaXpress permet l’acquisition de Z Stack 3D. Les images à plan Z peuvent être enregistrées individuellement ou réduites en images à projection 2D unique en utilisant un algorithme mathématique.
ACQUISITION D’UNE IMAGE CELLULAIRE 3D
Dans le corps du sphéroïde, les images peuvent être capturées de façon individuelle ou sous forme de Z Stack (plusieurs images prises à différentes profondeurs) en utilisant des équipements d’imagerie spécialisés.
ANALYSE D’UNE IMAGE CELLULAIRE 3D
Utilisez un logiciel d’analyse d’imagerie cellulaire pour réaliser une analyse quantitative des images cellulaires afin d’évaluer et de surveiller la façon dont les cellules s’expriment par rapport à différents marqueurs et afin de quantifier les résultats biologiques.
Logiciel d’imagerie haut contenu
Le logiciel d’acquisition et d’analyse d’image haut contenu MetaXpress est un outil d’analyse multiniveau pour un grand nombre d’applications 2D et 3D optimisé pour le système ImageXpress Micro Confocal. Les modules d’application d’acquisition et d’analyse intégrés pour les modèles cellulaires 3D simplifient la quantification haut débit de structures 3D avec des mesures de volume, d’intensité et de distance.