Que sont les acides nucléiques ?
Les acides nucléiques sont de grosses biomolécules communes à toutes les formes de vie connues. À l’état naturel, ils sont généralement présents sous deux formes : acide désoxyribonucléique (ADN) et acide ribonucléique (ARN).
Différence entre l’ADN et l’ARN
L’ADN et l’ARN sont composés de nucléotides, dont chacun est constitué d’un sucre à 5 atomes de carbone, d’une base azotée et d’un groupe phosphate. L’ADN se compose d’un double brin de paires de nucléotides, tandis que l’acide ribonucléique (ARN) se compose généralement d’un seul brin. Dans l’ADN, les nucléotides sont l’adénine, la cytosine, la guanine et la thymine, tandis que l’ARN contient de l’uracile à la place de la thymine. Les séquences de nucléotides d’ADN sont organisées en unités appelées gènes, qui contiennent les informations codant pour différentes protéines. L’ADN d’un gène est transcrit afin de produire une copie ARN du gène, qui sert ensuite de modèle pour la synthèse de la protéine.
Les altérations et mutations de l’ADN qui modifient la séquence des gènes peuvent entraîner un dysfonctionnement des protéines perturbant la fonction cellulaire normale. Le cancer constitue un excellent exemple de la façon dont les mutations génétiques peuvent perturber la régulation normale du comportement cellulaire, entraînant une croissance cellulaire incontrôlable. Les recherches sur la fonction des gènes et les modifications génétiques à l’origine des maladies continueront à déboucher sur de nouvelles thérapeutiques.
Méthodes de quantification des acides nucléiques
L’acide nucléique est souvent purifié à partir de cellules dans le cadre d’une gamme grandissante de méthodes de biologie moléculaire, notamment le séquençage et l’édition génétique. Avant d’être utilisés dans des applications en aval, les acides nucléiques sont détectés et quantifiés par UV ou spectrophotométrie de fluorescence. Habituellement mesurés individuellement dans des cuvettes, les échantillons sont à présent systématiquement analysés dans des microplaques.
Molecular Devices offre une solution de flux de travail complète pour la détection, la quantification et l’analyse des acides nucléiques. Nos notes d’application démontrent que la quantification et l’analyse des acides nucléiques en format microplaque permet un débit plus élevé par rapport aux autres méthodes, ainsi qu’un calcul automatisé des résultats.
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Mesures d’absorbance de l’ADN/ARN
L’absorbance d’un échantillon d’ADN mesurée à 260 nm sur un spectrophotomètre ou un lecteur de microplaques peut être utilisée pour calculer sa concentration. Quantification de l’absorbance pour des travaux sur l’ADN sur des échantillons compris entre environ 0,25µg/ml et environ 125 µg/ml en format microplaque.
Découvrez comment l’absorbance est mesurée sur nos lecteurs de microplaques en absorbance grâce à nos notes d’application :
eBook : Quantification des acides nucléiques et des protéines
Tests d’absorbance optimaux pour la quantification des acides nucléiques et des protéines
Les lecteurs de microplaques en absorbance sont largement utilisés dans les recherches basiques, la découverte de médicaments, la validation des tests biologiques, le contrôle qualité et les processus de fabrication dans les industries pharmaceutique, biotech, alimentaire et des boissons et dans le secteur de l'enseignement supérieur. Ces lecteurs permettent de réaliser des mesures rapides et sensibles d’un grand nombre d’analytes dans une vaste gamme de concentrations pour un grand nombre de tests, notamment tests ELISA, croissance microbienne, détection de composés et de contaminants majeurs, et quantification des protéines.
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Quantification fluorométrique des acides nucléiques
La quantification de l’ADN est une étape critique des méthodes de biologie moléculaire qui requiert une excellente précision et une grande fiabilité. Les méthodes actuelles doivent s'adapter à l’utilisation de volumes d’échantillon de plus en plus faibles pour des applications, telles que le séquençage nouvelle génération. En comparaison avec la quantification de l’ADN par spectrophotomètre, la méthode fluorimétrique offre plusieurs avantages importants tels qu’une augmentation significative de la sensibilité, une grande sélectivité pour l’ADN double brin (ADNdb) par rapport à l’ADN simple brin (ADNsb) ou à l’ARN, et une tolérance accrue aux molécules contaminantes (protéines et glucides).
Voici quelques notes d’application sur la quantification fluorimétrique des acides nucléiques qui peuvent se révéler intéressantes :
Génotypage SNP
Le génotypage est un processus permettant d’analyser les différences génétiques entre les individus en examinant leurs séquences d’ADN. Les polymorphismes mononucléotidiques (PMN), un type de variation génétique très courant, consistent en une seule mutation de nucléotide sur un locus spécifique. Le génotypage des PMN, particulièrement utile pour l’identification des mutations pathologiques touchant diverses espèces et plusieurs techniques de détection des PMN ont été développées dans ce but.
Dernières ressources
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Le guide ultime des solutions de lecteur de microplaques
The Ultimate Guide to Microplate Reader Solutions
L’évaluation des lecteurs de microplaques ne doit pas être fastidieuse. Tout d’abord, déterminez vos besoins d’application. Si votre budget est limité, un lecteur à mode unique dédié à votre application principale peut…
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Quantification sensible par fluorescence de l’ADN avec le kit de test Quant-iT PicoGreen dsDNA
Sensitive fluorescent quantitation of DNA with the Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit
L’ADN double brin est généralement quantifié dans des lecteurs de microplaques en mesurant l’absorbance de la solution d’ADN à 260 nm. Toutefois, cette méthode ne peut mesurer qu’environ 250…
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Plusieurs étapes à partir des stations de travail des lecteurs de microplaques
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Les chercheurs empruntent de nombreux chemins pour surmonter les difficultés des flux de travail. Par exemple, une station de travail comprenant un lecteur de microplaques peut prendre en charge plusieurs étapes, ce qui améliore l’efficacité et ajoute…
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Tests d’absorbance optimaux pour la quantification des acides nucléiques et des protéines
Streamline absorbance assays for nucleic acid & protein quantitation
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Détection de protéines et d’ADN à haut débit et faible volume sur le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus
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La quantification des protéines et des acides nucléiques sont des mesures essentielles en amont de nombreux tests sophistiqués de génétique et biologie moléculaire. Diverses méthodes ont été développées pour quantifier…
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Comme différents types d’échantillons à tester peuvent contenir des concentrations différentes d’ADN, la sélection d’un réactif fluorescent approprié ayant la sensibilité et la plage de détection requises est…
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Détectez les SNP grâce à la technologie de génotypage KASP sur les lecteurs de microplaques SpectraMax
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Le génotypage est un processus permettant d’analyser les différences génétiques entre les individus en examinant leurs séquences d’ADN. Les nombreuses méthodes de génotypage disponibles vous permettent d’étudier…