Électrophysiologie patch clamp
Accueil du fameux guide Axon :
Un guide complet de l’électrophysiologie et des techniques de biophysique en laboratoire
Électrophysiologie moléculaire patch clamp
La technique d’électrophysiologie moléculaire patch-clamp est un outil d’électrophysiologie polyvalent qui permet de mieux comprendre le fonctionnement des canaux ioniques. Toutes les cellules expriment des canaux ioniques, mais les cellules les plus souvent étudiées avec les techniques patch-clamp incluent les neurones, les fibres musculaires, les cardiomyocytes et les ovocytes surexprimant des canaux ioniques uniques.
Pour évaluer la conductance des canaux ioniques uniques, une microélectrode forme un joint de haute résistance avec la membrane cellulaire, puis un morceau de membrane cellulaire contenant le canal ionique d’intérêt est prélevé. Lorsque la microélectrode est scellée à la membrane cellulaire, une technique alternative est de rompre ce petit morceau pour donner à l’électrode un accès électrique à la cellule entière. Une tension est alors appliquée, formant un voltage-clamp, ou blocage de potentiel, et le courant membranaire est mesuré. La technique de current-clamp, ou de courant imposé, peut également être utilisée pour mesurer les changements de potentiel de la membrane. Les changements de potentiel ou de courant dans les membranes cellulaires peuvent être modifiés en administrant des composés capables de bloquer ou d'ouvrir les canaux. Ces techniques permettent aux chercheurs de mieux comprendre le comportement des canaux ioniques en état normal et en état pathologique, et comment différents médicaments, ions ou autres analytes peuvent modifier ces états.
Inscrivez-vous au webinaire à la demande : Analyse avancée des potentiels d’action à l’aide du logiciel pCLAMP d’Axon
Flux de travail de la méthode patch-clamp avec des instruments Axon
La gamme Axon Instruments® offre des solutions complètes pour le patch-clamp, incluant amplificateurs, numériseurs, logiciels et accessoires. Nos instruments de pointe facilitent toutes les expériences employant la technique d'électrophysiologie moléculaire patch-clamp, des plus petits enregistrements de canaux uniques aux plus grands enregistrements macroscopiques. L’ajout de la suite logicielle 11pCLAMP d’Axon crée un flux de travail optimisé, permettant de réaliser des expériences complexes et efficaces, et de générer des données de meilleure qualité.
- Préparer des solutions – Réalisez des solutions internes et externes. Ajustez les valeurs d’osmolarité et de pH.
- Préparer des cellules ou des coupes d'encéphale – Préparez des cellules en culture, des neurones isolés, des coupes d'encéphale ou des animaux entiers.
- Retirer et essuyer la pipette – Préparez l’électrode d’enregistrement. Retirer le tube capillaire en verre et essuyer l’embout de la pipette.
- Paramétrer le système de perfusion – Paramétrez le système de perfusion et le logiciel d’acquisition de données. Veillez à ce que le système soit protégé.
- Patcher une cellule – Utilisez le manipulateur pour toucher la membrane cellulaire avec la pipette. Veillez à ce qu’un joint d’étanchéité électrique hautement résistant se forme.
- Acquérir et amplifier le signal – Le signal est amplifié. Pour des résultats optimaux, veillez à utiliser le bon type d’amplificateur pour vos recherches - Amplificateurs Patch-Clamp Axon Instruments.
- Numérisation du signal – Le signal analogique est ensuite numérisé afin qu’il puisse être analysé - Axon™ Digidata® 1550B plus HumSilencer®
- Acquisition et analyse des données – Avec la suite logicielle pCLAMP11, des protocoles plus longs et plus complexes peuvent être programmés pour une analyse plus rapide des données et des mesures précises.
Liens rapides vers les bases de l’électrophysiologie patch-clamp :
En savoir plus sur les techniques d’électrophysiologie moléculaire (patch-clamp), de l’enregistrement à canal unique à l’enregistrement de cellules entières, en passant par l’enregistrement de potentiel de champ extracellulaire.