Plasmides AAV
Que sont les plasmides AAV ?
Le virus adéno-associé (AAV), un virus minute fréquent en biofabrication, est apprécié pour sa réplication limitée et son immunogénicité humaine réduite. La production de vecteurs viraux de grande qualité pour le transfert de gène nécessite un processus délicat de biofabrication, comprenant la fabrication d’ADN plasmidique et d’autres étapes complexes.
Flux de travail de production de plasmides AAV
- Culture cellulaire : construction du vecteur d’ADN AAV et expansion du plasmide. Préparation et amplification des plasmides codant pour tous les facteurs nécessaires à la génération de particules d’AAV recombinant.
- Adaptation des conditions de culture : optimisation des systèmes de culture en suspension ou adhérentes, notamment les formats 3D ou 2D, selon les exigences du procédé.
- Production de vecteur AAV : introduction transitoire de l’ADN du vecteur AAV dans des cellules ou établissement de lignées cellulaires stables pendant 2 à 3 jours de réplication et d’expression.
- Récupération de l’AAV : filtration et centrifugation du milieu de culture cellulaire pour éliminer les débris, en concentrant les vecteurs AAV. La filtration tangentielle (TFF) peut être utilisée pour une purification complémentaire. La capture et la récupération des particules d’AAV dans le milieu de culture cellulaire ou le lysat recourent à des techniques standard utilisées pour les protéines recombinantes, notamment la précipitation, la centrifugation, la chromatographie et la filtration tangentielle.
- Purification de l’AAV : utilisation de l’ultracentrifugation et de la chromatographie, notamment d’affinité ou d’échange d’ions, pour obtenir des préparations de vecteurs AAV de grande pureté. Maintien du contrôle qualité tout au long du processus.
- Titrage de l’AAV : l’analyse quantitative et qualitative des vecteurs AAV pour identifier le titre le plus élevé peut être réalisée en suivant des techniques standard, notamment la PCR en temps réel.
- Transduction des cellules de mammifères : les particules purifiées d’AAV peuvent être utilisées pour la transduction de lignées cellulaires de mammifères cibles, notamment les iPSC, les organoïdes 3D et la thérapie cellulaire CAR-T.
- Criblage et sélection de clones : le criblage des clones est nécessaire pour identifier les clones correctement transduits. La sélection de clones de grande valeur et l’enrichissement de groupes peuvent être effectués à l’aide de méthodes automatisées haut débit
- Résolution de l’hétérogénéité et isolement de cellules uniques : l’hétérogénéité du groupe de clones est résolue par des techniques d’isolement de cellules uniques avec une analyse basée sur l’image, apportant la preuve de monoclonalité de la lignée cellulaire transduite par AAV établie.
- Expansion et caractérisation : la caractérisation en aval de la lignée cellulaire cible peut être réalisée par des solutions automatisées d’imagerie haut contenu et par un test ELISA.
Solutions innovantes pour optimiser votre flux de travail de production de plasmides AAV
Chez MOLECULAR DEVICES, nous comprenons les complexités de la production de plasmides AAV. Notre gamme de solutions technologiques perfectionnées est conçue méticuleusement pour prendre en charge et optimiser chaque phase de votre flux de travail. En mettant l’accent sur la précision, l’efficacité et l’évolutivité, nous nous consacrons à l’excellence de chaque étape de votre processus de production de plasmides AAV, en veillant à ce que votre entreprise obtienne des résultats de pointe.
Systèmes de sélection de colonies microbiennes QPix™
Application dans le flux de travail AAV :
- Utilisé dans la phase de construction du vecteur d’ADN AAV et d’expansion des plasmides.
- Sélectionne efficacement les colonies contenant les concepts de plasmides souhaités.
- Peut être utilisé pour cribler des colonies avec des phénotypes spécifiques, en veillant à sélectionner le bon concept plasmidique.
Caractéristiques :
- Sélectionne jusqu’à 3 000 colonies par heure.
- Prend en charge un grand nombre de micro-organismes et de modalités de sélection.
- Assure la stérilité grâce à la désinfection par lumière UV et au lavage des broches.
- Offre plusieurs modes d’imagerie pour une sélection précise des colonies.
- Offre des capacités d’ensemencement et d’étalement automatisés.
- Options d’automatisation évolutives pour des besoins de débit variables.
Système de sélection de colonies de cellules de mammifères ClonePix™
Application dans le flux de travail AAV :
- Utilisé dans la phase de criblage et de sélection des clones.
- Crible et sélectionne des clones de grande valeur en fonction de la productivité de la protéine et d’autres caractéristiques.
Caractéristiques :
- Système automatisé pour la sélection de clones de grande valeur.
- Augmente la probabilité de trouver des lignées cellulaires optimales.
- Offre plusieurs méthodes de détection, dont la fluorescence.
- Maintient la stérilité grâce à la lumière UV et au lavage des broches.
- Utilise un milieu semi-solide pour la formation de colonies discrètes.
CloneSelect™ Imager FL
Application dans le flux de travail AAV :
- Utilisé dans la phase d’expansion et de caractérisation.
- Réalise l’imagerie et l’analyse des cellules de mammifères, en veillant à la monoclonalité.
- Peut être utilisé pour vérifier les modifications de gène.
Caractéristiques :
- Offre une imagerie en lumière blanche et par fluorescence.
- Génère automatiquement l’analyse de confluence et l’assurance de monoclonalité.
- Temps d’acquisition rapides et possibilité d’évaluer par imagerie une plaque de 96 puits en moins de deux minutes.
- Compatible avec divers types de cellules, notamment CHO, HEK et iPSC.
- Fournit des images haute résolution et une analyse intelligente.
Distributeur de cellules uniques DispenCell™
Application dans le flux de travail AAV :
- Utilisé dans la phase de résolution de l’hétérogénéité et d’isolement de cellules uniques.
- Distribue des cellules uniques en veillant à la monoclonalité de la lignée cellulaire transduite avec l’AAV établie.
Caractéristiques :
- Fournit une preuve de clonalité immédiate et traçable.
- Préserve la viabilité cellulaire par des manipulations en douceur.
- La forme compacte s’adapte à divers environnements de laboratoire.
- Utilise une pointe jetable pour éviter la contamination croisée.
- Interface intuitive sans nécessité d’étalonnage.