Détection, quantification et analyse des protéines

eBook : Quantification des acides nucléiques et des protéines

Tests d’absorbance optimaux pour la quantification des acides nucléiques et des protéines

Les lecteurs de microplaques en absorbance sont largement utilisés dans les recherches basiques, la découverte de médicaments, la validation des tests biologiques, le contrôle qualité et les processus de fabrication dans les industries pharmaceutique, biotech, alimentaire et des boissons et dans le secteur de l'enseignement supérieur. Ces lecteurs permettent de réaliser des mesures rapides et sensibles d’un grand nombre d’analytes dans une vaste gamme de concentrations pour un grand nombre de tests, notamment tests ELISA, croissance microbienne, détection de composés et de contaminants majeurs, et quantification des protéines.

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ELISA

Les dosages d’immunoabsorption enzymatique (ELISA) sont utilisés pour mesurer la quantité d’une protéine spécifique, en utilisant une microplaque, et les résultats sont le plus souvent détectés par absorbance dans la plage des longueurs d’onde visibles. Les formats ELISA par chimiluminescence et fluorescence offrent une meilleure sensibilité pour une quantification précise des analytes moins abondants.

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Applications des protéines fluorescentes

Les protéines dans les cellules eucaryotes existent dans un état dynamique, dans un équilibre hautement régulé entre la synthèse et la dégradation. Même si l’on comprend bien la synthèse des protéines après des décennies d’étude, les connaissances sur la dégradation des protéines ont vraiment progressé au cours de ces vingt dernières années. Les protéines fluorescentes peuvent être utilisées comme rapporteurs pour étudier la dégradation des protéines et les voies de signalisation cellulaire associées

Découvrez dans nos notes d’application comment les capteurs protéosomiques fluorescents sont utilisés.

• Rapporteurs fluorescents et chimioluminescents de multiplexage à cellules vivantes pour les exigences de dissociation dans la transduction du signal NFκB
• Mesure de l’inhibition protéosomique dans des cellules vivantes sur les lecteurs de microplaques Analyst® GT, FLEXstation® et Gemini EM avec le capteur protéosomique BD Biosciences

Quantification des IgG

La mesure précise et fiable du titre des anticorps monoclonaux (p. ex., IgG) est essentielle au développement et à la fabrication ultérieure de nombreux agents biologiques. Les tests Valita®TITER mesurent les concentrations d’IgG entre 2,5 et 100 mg/l ou entre 100 et 2000 mg/l, en utilisant un format haut débit « mix-and-read » avec résultat par polarisation de fluorescence (PF). L’utilisation des lecteurs de microplaques multimode SpectraMax avec mode de détection par PF a été validée avec les tests ValitaTITER. Pour plus d’informations sur les paramètres optimaux pour chaque lecteur, consultez notre note d’application :

• Plateforme de quantification d’IgG haut débit pour le criblage des clones lors de la recherche et du développement de médicaments

Mesurer la concentration des protéines (Bradford, BCA, etc.)

La concentration d'une protéine peut être mesurée directement, par absorbance à 280 nm dans un spectrophotomètre UV-visible, ou indirectement, en utilisant des méthodes colorimétriques telles que les tests BCA ou Bradford. Les protéines peuvent même être quantifiées au moyen de méthodes fluorimétriques.

Voici quelques notes d’application sur la quantification des protéines qui peuvent se révéler intéressantes :

• Intégrez la quantification des protéines basée sur BCA au lecteur SpectraMax iD5
• Mesurer les protéines totales dans des lysats cellulaires avec le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus
• Quantification des protéines avec le lecteur de microplaques EMax Plus
• Quantification directe des protéines avec la microplaque à micro-volume SpectraDrop
• Utilisation du kit NanoOrange Protein avec les lecteurs de microplaques SpectraMax

Détection du tryptophane

La fluorescence intrinsèque des protéines est due aux acides aminés aromatiques tryptophane, tyrosine et phénylalanine. Le tryptophane domine l’émission des protéines et est le plus sensible à la polarité des solvants et à l’environnement local. L’analyse des variations de la fluorescence du tryptophane peut permettre d’obtenir des informations sur la dénaturation et la conformation des protéines.

Dans ces notes d’application, nous démontrons la performance des lecteurs de microplaques multimode SpectraMax® pour les tests mesurant la fluorescence intrinsèque du tryptophane.

• Mesure de la fluorescence intrinsèque du tryptophane sur le lecteur de microplaques SpectraMax iD3
• Détection du tryptophane intrinsèque avec la plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3

Western Blot

Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Découvrez les diverses techniques utilisées pour détecter les protéines sur des membranes Western Blot, notamment la colorimétrie, la fluorescence et la chimiluminescence. Nous vous présenterons également un nouveau système de détection par immunotransfert, le premier en son genre, sur un lecteur de microplaques multimode.

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