Détecter, quantifier et analyser les protéines
L’analyse, la quantification et la détection des protéines sont essentielles à l’étude d’un grand nombre de processus biologiques. La mesure de la concentration d'une protéine est nécessaire pour les processus allant de la purification et du marquage des protéines à la préparation des échantillons pour l’électrophorèse. Les protéines peuvent être quantifiées directement par absorbance à 280 nm, ou indirectement en utilisant des méthodes colorimétriques (BCA, Bradford, etc.) ou fluorimétriques offrant des avantages tels qu’une plus grande sensibilité. Pour identifier et mesurer une protéine spécifique dans un échantillon complexe, par exemple un sérum ou un lysat cellulaire, on peut utiliser un test ELISA.
La signalisation cellulaire et d’autres processus biologiques peuvent être analysés au moyen de protéines fluorescentes. Par exemple, la protéine fluorescente verte (GFP) peut être exprimée dans des cellules vivantes et être utilisée pour visualiser la localisation et la dynamique des protéines dans des conditions expérimentales. Le tryptophane, un acide aminé dont les propriétés d’émission de fluorescence sont affectées par son micro-environnement, est également utilisé pour obtenir des informations sur les changements de l’état conformationnel des protéines.
Méthodes et techniques de quantification des protéines
Les lecteurs de microplaques avec des modes de détection par absorbance, fluorescence et luminescence offrent une solution polyvalente pour la quantification et l’étude des protéines. Nos notes d’application démontrent comment ces instruments peuvent être utilisés pour obtenir des résultats et les analyser.
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eBook : Quantification des acides nucléiques et des protéines
Tests d’absorbance optimaux pour la quantification des acides nucléiques et des protéines
Les lecteurs de microplaques en absorbance sont largement utilisés dans les recherches basiques, la découverte de médicaments, la validation des tests biologiques, le contrôle qualité et les processus de fabrication dans les industries pharmaceutique, biotech, alimentaire et des boissons et dans le secteur de l'enseignement supérieur. Ces lecteurs permettent de réaliser des mesures rapides et sensibles d’un grand nombre d’analytes dans une vaste gamme de concentrations pour un grand nombre de tests, notamment tests ELISA, croissance microbienne, détection de composés et de contaminants majeurs, et quantification des protéines.
eBook : Quantification des acides nucléiques et des protéines
Tests d’absorbance optimaux pour la quantification des acides nucléiques et des protéines
Les lecteurs de microplaques en absorbance sont largement utilisés dans les recherches basiques, la découverte de médicaments, la validation des tests biologiques, le contrôle qualité et les processus de fabrication dans les industries pharmaceutique, biotech, alimentaire et des boissons et dans le secteur de l'enseignement supérieur. Ces lecteurs permettent de réaliser des mesures rapides et sensibles d’un grand nombre d’analytes dans une vaste gamme de concentrations pour un grand nombre de tests, notamment tests ELISA, croissance microbienne, détection de composés et de contaminants majeurs, et quantification des protéines.
ELISA
Les dosages d’immunoabsorption enzymatique (ELISA) sont utilisés pour mesurer la quantité d’une protéine spécifique, en utilisant une microplaque, et les résultats sont le plus souvent détectés par absorbance dans la plage des longueurs d’onde visibles. Les formats ELISA par chimiluminescence et fluorescence offrent une meilleure sensibilité pour une quantification précise des analytes moins abondants.
ELISA
Les dosages d’immunoabsorption enzymatique (ELISA) sont utilisés pour mesurer la quantité d’une protéine spécifique, en utilisant une microplaque, et les résultats sont le plus souvent détectés par absorbance dans la plage des longueurs d’onde visibles. Les formats ELISA par chimiluminescence et fluorescence offrent une meilleure sensibilité pour une quantification précise des analytes moins abondants.
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Applications des protéines fluorescentes
Les protéines dans les cellules eucaryotes existent dans un état dynamique, dans un équilibre hautement régulé entre la synthèse et la dégradation. Même si l’on comprend bien la synthèse des protéines après des décennies d’étude, les connaissances sur la dégradation des protéines ont vraiment progressé au cours de ces vingt dernières années. Les protéines fluorescentes peuvent être utilisées comme rapporteurs pour étudier la dégradation des protéines et les voies de signalisation cellulaire associées
Découvrez dans nos notes d’application comment les capteurs protéosomiques fluorescents sont utilisés.
- Rapporteurs fluorescents et chimioluminescents de multiplexage à cellules vivantes pour les exigences de dissociation dans la transduction du signal NFκB
- Mesure de l’inhibition protéosomique dans des cellules vivantes sur les lecteurs de microplaques Analyst® GT, FLEXstation® et Gemini EM avec le capteur protéosomique BD Biosciences
Applications des protéines fluorescentes
Les protéines dans les cellules eucaryotes existent dans un état dynamique, dans un équilibre hautement régulé entre la synthèse et la dégradation. Même si l’on comprend bien la synthèse des protéines après des décennies d’étude, les connaissances sur la dégradation des protéines ont vraiment progressé au cours de ces vingt dernières années. Les protéines fluorescentes peuvent être utilisées comme rapporteurs pour étudier la dégradation des protéines et les voies de signalisation cellulaire associées
Découvrez dans nos notes d’application comment les capteurs protéosomiques fluorescents sont utilisés.
- Rapporteurs fluorescents et chimioluminescents de multiplexage à cellules vivantes pour les exigences de dissociation dans la transduction du signal NFκB
- Mesure de l’inhibition protéosomique dans des cellules vivantes sur les lecteurs de microplaques Analyst® GT, FLEXstation® et Gemini EM avec le capteur protéosomique BD Biosciences
Quantification des IgG
La mesure précise et fiable du titre des anticorps monoclonaux (p. ex., IgG) est essentielle au développement et à la fabrication ultérieure de nombreux agents biologiques. Les tests Valita®TITER mesurent les concentrations d’IgG entre 2,5 et 100 mg/l ou entre 100 et 2000 mg/l, en utilisant un format haut débit « mix-and-read » avec résultat par polarisation de fluorescence (PF). L’utilisation des lecteurs de microplaques multimode SpectraMax avec mode de détection par PF a été validée avec les tests ValitaTITER. Pour plus d’informations sur les paramètres optimaux pour chaque lecteur, consultez notre note d’application :
Quantification des IgG
La mesure précise et fiable du titre des anticorps monoclonaux (p. ex., IgG) est essentielle au développement et à la fabrication ultérieure de nombreux agents biologiques. Les tests Valita®TITER mesurent les concentrations d’IgG entre 2,5 et 100 mg/l ou entre 100 et 2000 mg/l, en utilisant un format haut débit « mix-and-read » avec résultat par polarisation de fluorescence (PF). L’utilisation des lecteurs de microplaques multimode SpectraMax avec mode de détection par PF a été validée avec les tests ValitaTITER. Pour plus d’informations sur les paramètres optimaux pour chaque lecteur, consultez notre note d’application :
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Mesurer la concentration des protéines (Bradford, BCA, etc.)
La concentration d'une protéine peut être mesurée directement, par absorbance à 280 nm dans un spectrophotomètre UV-visible, ou indirectement, en utilisant des méthodes colorimétriques telles que les tests BCA ou Bradford. Les protéines peuvent même être quantifiées au moyen de méthodes fluorimétriques.
Voici quelques notes d’application sur la quantification des protéines qui peuvent se révéler intéressantes :
- Intégrez la quantification des protéines basée sur BCA au lecteur SpectraMax iD5
- Mesurer les protéines totales dans des lysats cellulaires avec le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus
- Quantification des protéines avec le lecteur de microplaques EMax Plus
- Quantification directe des protéines avec la microplaque à micro-volume SpectraDrop
- Utilisation du kit NanoOrange Protein avec les lecteurs de microplaques SpectraMax
Mesurer la concentration des protéines (Bradford, BCA, etc.)
La concentration d'une protéine peut être mesurée directement, par absorbance à 280 nm dans un spectrophotomètre UV-visible, ou indirectement, en utilisant des méthodes colorimétriques telles que les tests BCA ou Bradford. Les protéines peuvent même être quantifiées au moyen de méthodes fluorimétriques.
Voici quelques notes d’application sur la quantification des protéines qui peuvent se révéler intéressantes :
- Intégrez la quantification des protéines basée sur BCA au lecteur SpectraMax iD5
- Mesurer les protéines totales dans des lysats cellulaires avec le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus
- Quantification des protéines avec le lecteur de microplaques EMax Plus
- Quantification directe des protéines avec la microplaque à micro-volume SpectraDrop
- Utilisation du kit NanoOrange Protein avec les lecteurs de microplaques SpectraMax
Détection du tryptophane
La fluorescence intrinsèque des protéines est due aux acides aminés aromatiques tryptophane, tyrosine et phénylalanine. Le tryptophane domine l’émission des protéines et est le plus sensible à la polarité des solvants et à l’environnement local. L’analyse des variations de la fluorescence du tryptophane peut permettre d’obtenir des informations sur la dénaturation et la conformation des protéines.
Dans ces notes d’application, nous démontrons la performance des lecteurs de microplaques multimode SpectraMax® pour les tests mesurant la fluorescence intrinsèque du tryptophane.
Détection du tryptophane
La fluorescence intrinsèque des protéines est due aux acides aminés aromatiques tryptophane, tyrosine et phénylalanine. Le tryptophane domine l’émission des protéines et est le plus sensible à la polarité des solvants et à l’environnement local. L’analyse des variations de la fluorescence du tryptophane peut permettre d’obtenir des informations sur la dénaturation et la conformation des protéines.
Dans ces notes d’application, nous démontrons la performance des lecteurs de microplaques multimode SpectraMax® pour les tests mesurant la fluorescence intrinsèque du tryptophane.
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Western Blot
Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Découvrez les diverses techniques utilisées pour détecter les protéines sur des membranes Western Blot, notamment la colorimétrie, la fluorescence et la chimiluminescence. Nous vous présenterons également un nouveau système de détection par immunotransfert, le premier en son genre, sur un lecteur de microplaques multimode.
Western Blot
Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Découvrez les diverses techniques utilisées pour détecter les protéines sur des membranes Western Blot, notamment la colorimétrie, la fluorescence et la chimiluminescence. Nous vous présenterons également un nouveau système de détection par immunotransfert, le premier en son genre, sur un lecteur de microplaques multimode.
Ressources sur la quantification et l'analyse des protéines
Note d'application
Mesurer les protéines totales dans des lysats cellulaires avec le lecteur de microplaques SpectraMax ABS Plus
Measure total protein in cell lysates with SpectraMax ABS Plus Microplate Reader
La quantification des concentrations de protéines issues des lysats cellulaires est une étape clé pour de nombreuses applications en aval, comme les tests Western Blot et les dosages d’immunoabsorption enzymatique (ELISA).
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Note d'application
Intégrez la quantification des protéines basée sur BCA au lecteur SpectraMax iD5
Streamline BCA-based protein quantitation on the SpectraMax iD5 reader
Apprenez à quantifier un échantillon de protéines cellulaires avec les kits de test de protéine BCA sur le lecteur de microplaques multimode SpectraMax® iD5.
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Note d'application
Détection du tryptophane intrinsèque avec la plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3
Intrinsic tryptophan detection with the SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform
La fluorescence intrinsèque des protéines est due aux acides aminés aromatiques tryptophane, tyrosine et phénylalanine. Le tryptophane, dont le seuil d’excitation maximum se situe approximativement entre 270 et 280 nm, a une émission…
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Note d'application
Utilisation du kit NanoOrange Protein avec les lecteurs de microplaques SpectraMax
Using the NanoOrange Protein Kit with SpectraMax Microplate Readers
Cette note d’application décrit l’utilisation du kit de quantification des protéines NanoOrange® Protein de Life Technologies sur les lecteurs de microplaques SpectraMax® avec le mode de détection par fluorescence et SoftMax…
Livre électronique
Tests d’absorbance optimaux pour la quantification des acides nucléiques et des protéines
Streamline absorbance assays for nucleic acid & protein quantitation
Les lecteurs de microplaques en absorbance sont largement utilisés dans les recherches basiques, la découverte de médicaments, la validation des tests biologiques, le contrôle qualité et les processus de fabrication dans les industries pharmaceutique, biotech, alimentaire et des boiss…
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Note d'application
Mesure de la fluorescence intrinsèque du tryptophane sur le lecteur de microplaques SpectraMax iD3
Measure intrinsic tryptophan fluorescence on the SpectraMax iD3 microplate reader
La fluorescence intrinsèque des protéines est due aux acides aminés aromatiques tryptophane, tyrosine et phénylalanine. Le tryptophane, dont le seuil d’excitation maximum se situe approximativement entre 270 et 280 nm, a une émission…
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Note d'application
Quantification des protéines avec le lecteur de microplaques EMax Plus
Protein quantitation with the EMax Plus Microplate Reader
Les lecteurs en points finaux abondent dans les laboratoires, car l’absorbance est devenue la détection de choix pour de nombreuses applications. Des exemples incluent les dosages ELISA pour la quantification des cytokines et des…protéines
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Note d'application
Rapporteurs fluorescents et chimioluminescents de multiplexage à cellules vivantes pour les exigences de dissociation dans la transduction du signal NFκB
Multiplexing Fluorescent and Chemiluminescent Live Cell Reporters to Dissect NFkB Signal Transduction Requirements
Le système de rapporteur luciférase chimiluminescent Ready-To-Glow Secreted Metridia de Clontech Laboratories a été utilisé pour surveiller l’activation des éléments de réponse à NFκB par le TNF-a, et a été…
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Note d'application
Quantification directe des protéines avec la microplaque à micro-volume SpectraDrop
Direct protein quantitation using the SpectraDrop Micro-Volume Microplate
La quantification des protéines en utilisant l’absorbance UV est une méthode non destructrice rapide s’appuyant sur l’absorbance des longueurs d’onde de lumière proches des UV par les résidus de tryptophane et de tyrosine dans…
Affiche scientifique
Mesure de l’inhibition protéosomique dans des cellules vivantes sur les lecteurs de microplaques Analyst® GT, FLEXstation® et Gemini EM avec le capteur protéosomique BD Biosciences
Measurement of Proteosome Inhibition in Live Cells on the Analyst® GT, FLEXstation® and Gemini EM Microplate Readers Using the BD Biosciences Proteasome Sensor
Le protéasome est un complexe protéique massif présent dans toutes les cellules eucaryotes (et certaines bactéries) qui élimine les protéines inutiles en les dégradant en peptides courts. Il se compose d’un…
Produits et services connexes de la quantification et de l’analyse des protéines
Lecteurs de microplaques Gemini XPS et EM
Détection de la fluorescence sans filtre
