Organoïdes

Étape 1) Préculture 2D

Les organoïdes dérivent soit de cellules primaires (par exemple, intestin, poumon ou rein) soit de cellules souches pluripotentes induites. Les cellules souches sont capables de se différencier et de s’auto-assembler en divers organoïdes spécifiques aux tissus.

Étape 2) Développement d’organoïdes 3D

Généralement, les cellules sont prémélangées avec du Matrigel et des gouttelettes sont placées dans une plaque de 24 puits à la température ambiante. Les plaques sont ensuite placées dans un incubateur afin de former un dôme solide de gouttelettes. Du milieu est alors ajouté pendant au moins 7 jours afin de favoriser la croissance et la différenciation des cellules dans un tissu spécifique (cerveau, intestin, poumons, etc.). Le milieu inclut une matrice extracellulaire (MEC), des protéines et différents facteurs de croissance, qui varient selon le type de tissu à faire croître.

Étape 3) Culture d’organoïdes

La culture d’organoïdes est un long processus pouvant comprendre plusieurs étapes utilisant des milieux différents. Durant ce processus, le phénotype cellulaire doit être surveillé (PCR, imagerie) ; généralement utilisé pour comprendre la biologie développementale et les tissus.

Étape 4) Surveillance et résultats

Avant de réaliser des expériences, les organoïdes doivent être surveillés et caractérisés afin de s’assurer qu’ils ont la structure et la différenciation tissulaires appropriées. L’imagerie haut contenu permet la surveillance et la visualisation de la croissance et de la différenciation des organoïdes, la reconstitution 3D des structures, l’analyse complexe de la structure des organoïdes, la morphologie et la viabilité cellulaires, ainsi que l’expression des différents marqueurs cellulaires.

Étape 5) Imagerie confocale et analyse 3D

L’imagerie confocale et l’analyse 3D des organoïdes permettent la visualisation et la quantification du nombre, de la distribution des tailles, du nombre de cellules, du contenu des cellules, de la viabilité cellulaire, du volume, ainsi que la quantification de la prolifération cellulaire et l’expression de marqueurs spécifiques. La caractérisation de multiples descripteurs quantitatifs des organoïdes pourrait être utilisée pour étudier les phénotypes des maladies et les effets des composés.